細胞生長的ATP檢測

1.ATP反應液(Bio-Orbit)是粉末狀混合物，含有熒光素、熒光素酶、0.5mmol醋酸鎂、50mg BSA和0.1μmol無機焦磷酸。在4℃可以保存1個月。用前用10ml含2mmol/L EDTA的0.1mol/L pH7.75 Tris-醋酸緩沖液稀釋。稀釋液分裝后可在-20℃長期保存。

2.在已經完成促增殖或抑生長試驗后的96孔細胞培養板中(每孔含100μl細胞培養液)，每孔加0.1ml ATP釋放因子，室溫中反應5分鐘。取另一塊96孔細胞培養板，從第一塊板的各孔中吸0.1ml細胞溶解物到第二塊板的相應各孔。

3.在低于25℃中，將第二塊板置自動多孔熒光檢測儀中。用自動加樣器，每孔加入20μl ATP反應液，立即檢測10秒鐘的熒光強度。溫度升高，檢測敏感性就下降。

4.用RLU(Y軸)對細胞因子標準品的稀釋度(X軸)作標準曲線，根據標準曲線確定待測樣品中細胞因子的含量。