紫外一可見分光光度計在藥物分析中是必不可少的分析儀器,我們現就儀器的安裝,調試,維
修和測試中碰到的問題向操作者提出兒點建議.
1應注意的問題
1.1 儀器光度的線性
眾所周知,光吸收分析必須符合郎伯一比爾定律的線性關系.儀器光度線性程度與光源能量
的強弱,接收器光信號最低檢出限,最高接收能力和單色的質量,性能有關.我們用溶液稀釋法檢
在儀器的光度線性.選擇校正的石英試樣池.用0.05mo1/L硫酸溶液為空白,按藥典規定波長在
350nm, 313nm, 257nm.
235nm測A值(單光束儀器測出T值后再換算成A值),再根據各點的濃度
計算出各點的吸收系數r,.在座標紙上,以各點的吸收度A為橫座標,相應的吸收系數廠.為縱
座標,繪出4個波長的吸收系數一吸光度曲線,我們對9臺不同廠家生產的儀器進行測試,結果見
圖1,
12光度準確性
1.2.1光度誤差在日常使用中,往往是光度準確性與重現性困難測試者.要測得正確可靠的數
據取次于①樣品來源.②制樣技術(包括稱量,容量,溶劑試劑,pH值,時間,溫度等)③試樣池
質量(試樣架位置,池質量等).④儀器本身的性能(光學系統性能,放大器穩定性和線性,接收
器的線性及噪聲水平,機械系統或計算機對儀器控制能力等).⑤儀器操作(基線校零空白對照等).
1.2.2定里分析法選擇合適的計算方法,尤其是在計算法中有導數表示,聯立方程等,最常用的標
準曲線法用此法是因樣品線性較差,其影響因素多,如在波長在相當大的幅度內變化不定且易產生
較大誤差時,才用標準曲線法.如果因無標準或其它原因,借用別人在其它環境, 其它儀器測得的
標準曲線直接引用,那么其誤差是可想而知的.
2討論和建議
2. 1測定光度曲線的線性
光度線性是在于E. 的平均值〔以藥典的附錄為依據即E"---124.50( X 235nm) ;
刀,一144. 00 ( X 257nm):廠,一48.62(a
313nm):刀,..二106.6(350nm)偏差不超過士0.1%的一段坪區
為這臺儀器的線性范圍或最佳工作范圍.我們對不同檔次的9臺儀器進行測試光度線性,有的A值
在0. 20^-0. 5 (1. 5)間;有的A值在0. 20^-2. 5 (3. 5)間:有的A值在0. 13--3.
5間,這一結果表明
儀器檔次越高吸光度A值線性越寬.操作者應對其儀器的線性有所了解.
9 臺儀器的E-A曲線圖形并不一致,這是由儀器光路特性決定,在線性坪區的兩端,有6臺儀器是
2003年實驗室管理科學研討會論文集
低濃度時向上翹,高濃度時向下翹,有2臺儀器是高低濃度都向下翹,有2臺儀器的四個濃度的E-A
曲線上下翹的方向不一致.同一樣品在濃度較低的情況下, 當A值小于0. 15以下時,在不同儀器
測得A值誤差就大.例如紅花黃素吸收度A在島津UV-200測A值為0. 112(正好在曲線下限低于平
均值),在DMS200型測A值等于0. 186(曲線下限高于平均值),那么就會出現兩臺測得值相差為60
0n以上.因而測試者都應力求將樣品濃度控制在0. 2-1. 5A之間.線性范圍最可靠.尤其在一些復
方藥品中,受提取或顯色反應的影響連對照品的A值都在0. 1左右,那么測得的樣品數據沒有任何
定量意義.測試中很多測試者都將此光度線性忽略.
2. 2光度誤差是綜合性誤差作為測試者如果無法掌握上述0102(3)(47條那么就必須作好逗魚兩
條.正確制備試樣,正確操作儀器和正確選擇樣品最佳測試方法就尤重要了.
2. 3在定量分析中有計算法對照品法和吸收系數法計算法應對其概念能清,對于智能型儀器所給
參數應合理選擇,避免系統誤差的代入;對照品法是用對照品與測試樣品比較,操作簡便,對儀器
的操作要求不高,甚至有些時候對空白對照的要求很小,在同等條件下,測定結果誤差小,在國外的
文獻上基本用此法,但對照品的來源標化和公認性要求高,取樣量和稀釋倍數不能太小;吸收系數法
(絕對值法)由于對照品不易得到且純度是值得考慮的問題,就我國現狀來說用E",,值法,各地作的
結果都很穩定重現性好,在單一成分的測定中是首選方法,但使用 E'%.值法時,操作人員必須嚴格遵
循操作規程,依照郎伯一比爾定律.
3結束語 總之對紫外一可見分光光度計的使用,除使用計量檢定合格的儀器外,還應了解這臺僅器的
性能和對所測試樣的適應程度,才能在藥物研究,藥品標準制定,標準修改及檢驗過程中不出現由
于使用不當對結果帶來大的誤差.只要略加用心,認真讀通使用說明書,就可免去一些不必要的誤
差,使其測試數據正確可靠.
出口玉米中殺螟松殘留量快速測定法
