Waters液相色譜整個操作過程

油品分析
1 方法概要
高效液相色譜法
2 參考文獻
2.1 Waters 高效液相色譜儀使用手冊
3 儀器及試劑
3.1儀器

3.1.1Waters 高效液相色譜儀（1525泵，2487紫外檢測器，2414示差檢測器，HR 0.5凝膠色譜柱,HR1凝膠色譜柱）
（儀器使用方法見儀器說明書及使用注意事項）
3.1.2玻璃注射器（1ml），平頭進樣針頭（22#），一次性過濾器（有機系，0.45 μm）,一次性注射器（5ml），玻璃試劑瓶（10ml,帶蓋）
3.2試劑
四氫呋喃（HPLC級）
4 實驗步驟
4.1開機
4.1.1開機前準備
在容器中放入已過濾脫氣好的四氫呋喃流動相，把吸濾過濾頭放入容器中。
4.1.2打開所需儀器的電源開關。
4.1.3等各儀器自檢通過后，打開電腦，雙擊Breeze，進入工作站。

4.2儀器準備
4.2.1泵清洗
單擊下圖標

在Purge Wizard頁面Purge Pump選項前的方框打勾，即選擇清洗泵。單擊Next,進入Prime Pump界面。

將排液閥反時針方向轉松，用針筒抽取約10mL流動相，再將排液閥順時針方向擰緊。

向右打開參考閥。單擊Next，選擇要沖洗的泵，及沖洗流速。單擊Next,清洗開始。

儀器默認時間為5min，若需停止沖洗，單擊Stop Purge。沖洗完成后，出現Reconnent column界面，

向左關閉參考閥，單擊Finish，完成清洗。

4.2.2流速調節

在工作站溶液輸送控制區域，確定下面圖標按鍵處于按下狀態，

單擊0.00，

輸入0.10，

單擊GO!

在1min內，流速提升至0.10ml/min。

按同樣操作，升至0.20 ml/min，再至0.30 ml/min。

4.2.3平衡系統
在樣品注射操作區域單擊下載按鍵

在Equilibrate System對話框選擇所用的方法，單擊Equilibrate，如下圖

開始系統平衡，約1.5小時。

4.3樣品處理
4.3.1稱取0.5%標樣1.0g(準確至0.001g)

用5ml四氫呋喃溶解，混勻。

用0.45μm針頭式過濾器過濾，放入超聲波清洗器，超聲除氣5min。
4.3.2稱取樣品1.0g(準確至0.001g)，用5ml四氫呋喃溶解，混勻。

用0.45μm針頭式注射（下圖1）加孔徑為0.2微米（下圖2）濾芯。
圖1

圖2

過濾器連接好如下圖



用過濾器過濾已溶解的樣品到原25ml容量瓶

過濾完后在超聲波中除氣泡5分鐘

4.4樣品分析
等待色譜柱、系統平衡，基線穩定后，單擊下圖

出現下圖，

在Specify single inject parameters對話框內設置好樣品信息，包括樣品名稱，樣品類別，儀器方法，運行時間等。單擊inject，
系統出現Manual injection instructions對話框如下。

用所要檢測的樣品清洗1ml注射器3次。緩慢吸入0.4ml左右樣品，如下圖

小心除去氣泡并確保進樣量大于0.2ml，將注射器插入注射閥。

樣品注入前，確定手動注射閥在Load位置（如上圖）。
注入樣品，將閥門轉到inject位置（如下圖）

進樣完成后，再轉回Load位置。

按照空白，標樣，樣品順序依次進樣分析。

樣品開始分析如下圖
樣品分析完如下圖


4.5.1定量計算
分析樣品前，先對標樣進行分析，評價所用標準曲線是否適用當前分析。
單擊Find Data，在 Channels界面，單擊Update，選擇要分析的文件，單擊右鍵，選擇Review。在file里單擊Open Method，選擇所用的數據處理方法，單擊Open。在View Data界面，單擊

（integrate），
單擊

（quantitate）。在Peaks界面將看到分析結果。確定分析結果準確可靠后，在File欄，選擇Save Result。

4.5.2分析報告

單擊Find Data，在Result界面，單擊Update。選擇所要報告的結果。單擊右鍵，選擇Preview，在Open Report Method對話框，選擇所用報告的格式，輸出分析報告。
4.6關機
1．用0.3ml/min沖洗色譜柱30min,排出流路中可能有的雜質。
2．泵停止退出工作站，關閉儀器電源。
3. 在設備使用記錄上記錄使用情況。