酶聯免疫（ELISA）試劑盒在操作時應該注意的問題

酶聯免疫試劑盒是比較快捷方便的藥物殘留檢測方法，但對實驗操作條件的要求比較嚴格，實驗條件主要有兩方面組成：

1、 實驗室的操作環境(但ELISA試劑盒對實驗室操作環境的要求是幾種藥物殘留檢測方法中相結較低的)

2、 操作人員的操作熟練程度：由于大部分的試驗操作步驟都是由實驗人員來完成的，人為的誤差相對嚴重一些。

下面所介紹的內容是進行ELISA操作時應該注意的問題。

酶聯免疫試劑盒操作的通用規則：

1、 要確保微量加樣器的準確性，可以使用蒸餾水和電子天平進行確定(由于蒸餾水不含雜質，溫度環境為20℃左右時，1ml的水可以看作是1g，200ul的水可以看作是0.2g)，每一把微量加樣器都應該將其最高量程和最低量程進行確定。

2、 在使用微量加樣器時，吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭，即使吸取標準品溶液。

3、 吸取液體時速度不且太快，以免產生氣泡，吸取的量不夠準確。

4、 將液體加到酶標孔中時，避免槍頭和孔內液體接觸，可使槍頭的液體和孔壁接觸，液體會自然流下去。吸入液體時的最好方法是吸兩檔打一檔，防止由于槍頭的毛細作使得部分液體不能流出而造成誤差。

5、 吸取液體時要選用量程和需要量接近的微量加樣器吸，減少誤差。

6、 液體全部加入酶標孔后，最好將酶標板放在桌子上平行輕輕搖晃30s，使液體充分混合均勻，也使其得到充分的反應。

7、 孵育時要使蓋板膜封好酶標板，防止水分蒸發，以防曲線不成線形。

8、 實驗前半個小時將試劑從冰箱中取出，使試劑盒中的所有試劑與提取好的樣品溶液的溫度相同。(酶標板只要取出需要量)

9、 由于底物顯色劑對光及其敏感，因此要避光保存。

10、 手工洗板時每次加入洗滌液后，應靜置15-30s，不要將一個酶標孔中的洗滌液濺入另一酶標孔中，防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標板放在毛巾或吸水紙上拍干。

11、 檢測吸光值前應將酶標儀打開，將其預熱30min以上。

12、 底物為TMB，避免與皮膚相接觸。終止液為2mol的濃硫酸，具有腐蝕性，應盡量避免接觸皮膚。

13、 孵育時間應嚴格按照試劑盒說明書上的時間為準。

14、 要盡量做雙孔實驗，這樣才既能保證數據的準確性，又能反映出試劑盒的精密度。

15、 沒有去離子水或雙蒸水時，可以使用娃哈哈純凈水配制溶液，切勿使用自來水。

16、 不同廠家生產的試劑盒因生產工藝和操作方法略有不同，所以務必按照所用試劑盒嚴格操作，否則容易產生檢測結果的不確定性。且同一廠家不同批次的產品也不能交叉使用。