蜂膠、楊樹葉及楊樹芽中水楊苷和蘆丁6種用量比較

上一篇 / 下一篇 2009-04-22 14:48:39

蜂膠是意蜂采集楊樹等植物的新生枝芽和愈傷組織的分泌物，并混入蜂蠟等其自身分泌物所形成的一種黏性物質。2005版《中國藥典》開始收錄蜂膠。市場上有人將楊樹葉、芽等粉末摻人蜂膠中，得到的劣質蜂膠在顏色、氣味、形狀上都與真蜂膠十分相似，給蜂膠的鑒定工作帶來了困難。本文對蜂膠及楊樹葉、芽中的水楊苷和蘆丁兩種糖苷的含量進行了HPLC測定和比較。
　　一、儀器與試藥
　　高效液相色譜儀(BWAICLC98II系統，P98II泵，UV98I紫外檢測器)；超聲波清洗儀(KQ-100B)；對照品，蘆丁(Rutin，中國藥品生物制品鑒定所)，水楊苷(D一(一)一SalicinSigma，公司)。乙醇(分析純，北京化學試劑廠)，甲醇(色譜純，天津四友)；水(娃哈哈純凈水)。
　　蜂膠樣品10個，農業科學院蜜蜂研究所提供。楊樹芽樣品4個，分別為楊柳科植物毛白楊PopulustomentosaCarr．、北京楊Populusxbeijingensis、銀白楊PopulusalbaLinn．和加拿大楊PopulusCanadensisMoench的葉，楊樹芽為加拿大楊的新生芽，采自藥植所植物園，本所標本館米泰康先生鑒定。
　　二、方法與結果
　　1．供試品溶液制備
　　蜂膠、楊樹芽樣品：取0．5g，精密稱定，置于100mL容量瓶中，加入50％L醇，超聲提取30rain，靜置，以50％L醇稀釋至刻度，過濾，備用。
　　楊樹葉樣品：取1g，精密稱定，置于100mL容量瓶中，加入50％乙醇，超聲提取30rain，靜置，以50％乙醇稀釋至刻度。精密吸取上清液10mL于蒸發皿中，水浴揮干，殘渣用少量50％乙醇溶解轉移，定溶至lmL，過濾，備用。
　　2．對照品溶液的制備
　　分別精密稱取水楊苷和蘆丁對照品12．3mg和10．0mg置于10mL容量瓶中，加50％乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，備用。
　　3．色譜條件
　　KromasilC185μ250x4．9mm；檢測波長：268nm；柱溫：25℃；流速：lmL／min流動相：甲醇-1．5％磷酸梯度洗脫。時間(min)[甲醇％(v／v)]如下：0[9]，30[1]]，40[35]，70[35]，71[100]，85[100]。
　　4．線性關系考察
　　分別精密吸取對照品溶液1，3，5，7，10／μl注入高效液相色譜儀，按照上述色譜條件測定。色譜峰面積(A)與進樣量(C)有良好的線性關系。水楊苷的線性方程為：
　　Y=81497x+9606．6，r=0．9996。蘆丁的線性方程為：Y=699220x+117415，r=0．9998。結果表明，水楊苷和蘆丁分別在1．23~12．3~g和1．O~lO．O／xg范圍內線性關系良好。
　　5．精密度試驗
　　精密吸取對照品溶液10tzl注入高效液相色譜儀中，重復5次，結果水楊苷和蘆丁的峰面積平均值分別為1．003×106和7．083X106，RSD分別為1．6％和2．0％。表明該方法精密度較好。
　　6．重復性試驗
　　平行制備5份加拿大楊樹葉樣品溶液，按照上述方法測定含量，3次測定的水楊苷和蘆丁的平均值分別為：4．5％和3．8％，RSD分別為1．4％和1．8％，該結果表明本法具有很好的重復性。
　　7．回收率實驗
　　精密稱取5份加拿大楊葉樣品各0．5g，分別置于lOOmL量瓶中，加入水楊苷和蘆丁對照品適量，加50％乙醇超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻。準確吸取樣品溶液101xl，注入高效液相色譜儀中(見表1、表2)。
　　8．含量測定
　　精密吸取10種蜂膠樣品、4種楊樹葉樣品及1種楊樹芽樣品溶液各lOtxl，注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，按外標法計算水楊苷和蘆丁含量。在10個蜂膠樣品中均未檢出水楊苷和蘆丁。楊樹葉、楊樹芽樣品中檢出水楊苷和蘆丁。
　　三、結果與討論
　　本試驗對蜂膠及楊樹葉、芽中的水楊苷和蘆丁兩種糖苷的含量進行了HPLC測定。結果，在蜂膠樣品中均沒有檢測出這兩種糖苷。
　　在毛膠中直接摻入楊樹葉或楊樹芽粉末是一種比較常見的蜂膠摻假方法。本試驗方法可用于檢出直接摻有楊樹葉或者芽粉末的摻假蜂膠。
　　通過前期文獻調研，發現在幾乎所有(僅1個例外)的蜂膠化學成分研究的文獻中，均沒有從蜂膠中分離得到苷類化合物的報道。因此我們提出，在蜂膠中可能不含有苷類物質。本文從實驗數據上支持了上述觀點。此外，有文獻報道f21從蜜蜂咽下腺和蜂蜜中均分離得到糖苷酶。綜合分析上述情況，我們認為，在蜜蜂采集加工蜂膠的過程中，膠原植物中的苷類物質被其分泌的糖苷酶水解成了苷元。
　　在我國蜂膠的國家標準和行業標準中，對蜂膠中黃酮類物質的測定，采用了比色法和高效液相色譜法，都以蘆丁(槲皮素一3一蕓香糖苷)作為標準物質。這些方法值得商榷。