可逆高效液相色譜法測定水楊酸軟膏中水楊酸含量

【摘要】  目的：建立水楊酸軟膏中水楊酸含量的可逆高效液相色譜法。方法：選擇合適的溶劑，在229 nm波長處測定水楊酸軟膏中水楊酸的含量。結果：在此方法下能排除敷料的干擾，測得水楊酸線形范圍為0.5~2.5 mg/ml，回收率為99.08％。RSD為0.49％。結論：此法能簡便、快速、準確地測定制劑中主要成分的含量，使用價值較高。

【關鍵詞】  水楊酸軟膏；水楊酸；可逆高效液相色譜法

    水楊酸是皮膚科制劑中常用藥物，具有殺菌抑菌、軟化角質層的作用。水楊酸軟膏以水楊酸為主成分，配以皮膚滲透劑月桂氮酮、甘油等藥物。以卡波莫940為 基質，制成涂展性好，滲透力強，不污染衣物，無油膩感的制劑，在臨床上應用理想。但由于所采用的基質干擾，造成含量測定不易[1]，為此建立的高效液相色 譜法能快速簡便地測定制劑中的水楊酸含量，使用價值較高。

    1、儀器與試劑

    VARIN9012-9050高效液相色譜儀；紫外可見分光光度儀。水楊酸對照品(中國藥品生物制品檢定所)。5批水楊酸軟膏，由南通大學附屬醫院提供。乙腈、甲醇(色譜純)、重蒸水、醋酸銨、三乙胺、氯仿(分析純)。

    2、方法與結果

    2.1   色譜條件與系統適用性試驗   色譜柱：C18（150 mm×4．6 mm，5 μm）。流動相：乙腈-甲醇-2％醋酸銨（14∶43∶43）1000 ml加三乙胺0.2 ml。檢測波長：229 nm流速：1.0 ml/min，柱溫：30℃進樣量：10 μ1。外標法峰面積定量，對照品A、樣品B色譜圖見圖l。在該色譜條件下，水楊酸的保留時間為6.3 min，理論塔板數為4904。

    2.2   線形關系   精密稱取干燥至恒重的水楊酸對照品100 mg，分別置10 ml 量瓶中，用氯仿-甲醇(1∶1)溶解并稀釋至刻度，制成10 mg/ml的溶液。分別精密量取該溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 ml置10 ml量瓶中，用氯仿-甲醇(1∶1)稀釋至刻度。在上述色譜條件下，分別精密進樣10 μl，測定峰面積，對結果進行回歸分析，(色譜圖見圖1)。結果表明：進樣量在0.5~2.5 mg/ml峰面積和對照品的濃度線性關系良好，經統計學處理求得回歸方程為：y=7x+778(n=5)  r=0.9998。

    2.3   精密度實驗   取同一對照品溶液，1天內連續測定5次和每天取樣測定連續測定5天，進行日內、日間精密度測定。結果水楊酸日內RSD為0.91％(n=5)，日間RSD為0.98％(n=5)。結果表明：精密度良好。

    2.4   重復性試驗   按對照品溶液配制方法平行配制5份溶液，每份連續進樣5次，記錄峰面積。測得水楊酸的RSD為0.24％。結果表明：重復性良好。

    2.5   干擾性試驗   按處方配制除水楊酸的空白基質200 mg，按照含量測定方法處理樣品，進樣10 μl，觀察液相色譜圖。結果表明空白基質在此方法下不干擾水楊酸的含量測定。

    2.6   回收率試驗   精密量取5份已知含量的樣品分別加入對照品2、5、10 mg/ml，配制成高、中、低3種濃度，按照含量測定方法處理樣品，進樣10 μl，計算回收率，結果表明：回收良好，見表1。

    2.7   樣品含量測定   精密稱取水楊酸軟膏約200 mg（相當于水楊酸10 mg），置100 ml量瓶中，用氯仿-甲醇(1∶1)加熱溶解并稀釋至刻度，搖勻，用干燥濾紙過濾。棄去初濾液，精密量取續濾液5 ml，置100 ml量瓶中，用氯仿-甲醇(1∶1)稀釋至刻度，用0.46 μm濾膜濾過即得樣品溶液。取上述溶液各10 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以外標法計算百分標示含量。(見表2，色譜圖見圖1) 。

    3、討      論

    溶劑的選擇：水楊酸在有機相中溶解度大于在水中，故選擇氯仿-甲醇(1∶1)為溶劑較為合適。檢測波長的選擇：水楊酸在該溶劑中最大波長為229 nm，229 nm為檢測波長，誤差較小，準確度高。流動相的選擇：曾選擇甲醇-水系統為流動相，但發現水楊酸有拖尾現象，最后采用醋酸鹽-甲醇-乙腈系統為流動相，并 用三乙胺改善拖尾現象。方法的選擇：在本制劑中采用的基質卡波莫940分子中存在大量羧酸基團，因此無法用常規的堿滴定法測定水楊酸的含量，而相對于紫外 分光光度法本法更加靈敏和準確，雜質對結果影響很小。本法簡便快速，準確靈敏，實用價值較高。