Ethos Biosciences-Nephrat II ELISA，輕松檢測生物樣本中的大鼠白蛋白濃度

Nephrat II是一種酶聯免疫吸附測定（ELISA），用于定量測量生物樣本中的大鼠白蛋白濃度。

預期用途 ：

Nephrat II專為尿液樣本設計，但也可輕松適應其他生物樣本。該檢測用于研究應用，不適用于診斷用途。

技術背景

Nephrat II是一種直接抗體捕獲競爭性檢測。Nephrat II檢測板涂有大鼠白蛋白（r白蛋白），這是固定相或吸附相抗原。將含有r白蛋白的樣本加入板中，這些樣本提供移動相中的抗原。隨后，將抗r白蛋白抗體-HRP偶聯物加入板中。  

偶聯物中的抗體部分會與固定相中的大鼠白蛋白或移動相中的白蛋白結合，因此稱為競爭性結合。移動相中未反應的試劑和免疫復合物隨后被洗去，只有與吸附相抗原結合的偶聯物會保留下來。  

使用TMB（3,3',5,5'-四甲基聯苯胺）作為HRP的顯色底物來測定結合的偶聯物。將其加入板中，顏色會在5-20分鐘內顯現。通過加入稀酸終止反應。  

通過運行標準品的系列稀釋液與樣本一起進行檢測，以標準化檢測。使用酶標儀在450 nm處測量含有稀釋標準品和樣本的孔的吸光度。  

顏色強度與移動相中r白蛋白濃度的對數成反比。因此，含有高濃度r白蛋白的（移動相）樣本會產生淺色孔，而幾乎不含或不含r白蛋白的樣本則會呈現深色。通過模擬標準品的劑量-反應曲線，并根據測量的吸光度計算未知樣本濃度，從而獲得定量結果。

樣本采集與儲存

采集樣本時不要添加防腐劑，并在必要時通過離心澄清。澄清后的尿液可在4oC下保存長達1周，或在-60oC下保存長達2個月。在檢測前，讓樣本恢復至室溫。解凍冷凍樣本時不要加熱。

艾美捷Ethos Biosciences-Nephrat II(大鼠白蛋白ELISA)【#NR002】組成 ：

1. 2塊96孔Nephrat II檢測板  

2. 1瓶1.8 mL大鼠血清白蛋白（RSA）標準品  

3. 2瓶12 mL NHEBSA（稀釋液）  

4. 2瓶12 mL抗RSA抗體-HRP  

5. 2瓶12 mL TMB顯色劑  

6. 2瓶12 mL酸性終止液  

NHEBSA、RSA標準品和HRP偶聯物均含有防腐劑（異噻唑啉酮）。TMB顯色劑含有甲醇、二甲基亞砜、丙酮、3,3',5,5'-四甲基聯苯胺和過氧化氫。終止液含有稀硫酸。這些試劑可能存在接觸危害，應遵循常規實驗室安全程序。試劑盒各組分即開即用，但在開始檢測前應恢復至室溫。只需在開始前將試劑盒組分放置在實驗臺上1小時即可。檢測板為干板，但無需預處理即可用于檢測。將對照品、標準品、樣本和HRP偶聯物直接加入板中。

檢測步驟

檢測需要將對照品、標準品和樣本加入板中。檢測體積為100 μL。這些添加應使用適當的移液器完成，即可調節至100 μL的移液器。對于樣本稀釋，將10 μL樣本加入90 μL稀釋液中，這需要可設置為這些體積的移液器。HRP偶聯物按每孔100 μL加入。最好使用多通道移液器完成此操作。  

加入HRP偶聯物后，將板孵育30分鐘。為確保板處于穩定的環境中，應在密閉容器中進行孵育，該容器處于濕潤的環境中。使用一個塑料容器（如Tupperware），在容器底部放置一條濕潤的紙巾，已被證明是一個滿意的孵育箱。  

30分鐘后，通過洗滌板去除溶液相中未反應的試劑和r白蛋白-抗r白蛋白PAb-HRP偶聯物復合物。對于大多數實驗室，冷水自來水可作為洗滌緩沖液。如果洗滌池有限，可使用洗滌緩沖液洗滌檢測板。推薦使用Ethos的TEA洗滌緩沖液。  

檢測的最后一步是使用HRP底物TMB。將其按每孔100 μL加入。經過適當的顯色時間后，使用稀硫酸終止反應。這兩個步驟都應使用多通道移液器完成。

艾美捷科技是Ethos Biosciences的中國代理商，為科研工作者提供優質的產品與服務。

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