液相色譜方法開發

液相色譜方法開發

液相色譜適合80%化合物的測定，按照檢測器可檢測化合物的范圍，如紫外檢測器可檢測含共軛結構的化合物，如含苯環，共軛雙鍵，雜環等具紫外吸收的化合物。示差檢測器可檢測所有的化合物，是通用型檢測器，原理是化合物折光率的不同。熒光檢測器可以檢測能產生熒光的物質。現在的紫外檢測器一般擴展到可見部分，對于有顏色的物質可以按照吸收波長進行檢測。蒸發光散射也是通用型檢測器，通過去溶劑，按照固體對光的散射不同進行檢測。還有就是質譜檢測器和其他比較特殊的檢測器。

在一臺LC/DAD上如何開發方法呢。

步驟可以是這樣：

1.       化合物性質，明確正向，反相和溶劑。

2.       柱子，C18柱還是極性稍強的CN柱，氨基柱等。

3.       流動相，如果是反相，水乙腈體系最好，按照化合物性質調Ph值或加鹽，如果方法需要移植到MS上，只能加揮發性鹽類，如乙酸銨等。

4.       設定梯度，可以是有機相從5%-100%在30分鐘內走完，保持20分鐘，應該可以使全部的峰流出。

5.       DAD可設定采集光譜254，210nm，采集全波長光譜圖（3D）。

6.       按照梯度洗脫的結果，優化洗脫程序。

7.       按照全波長譜圖設定化合物檢測波長。