高靈敏度和高特異性RT-qPCR探針主凍干物/RT-qPCR master mix

上一篇 / 下一篇 2024-04-22 16:15:59/ 個人分類：生化試劑

SCRIPT. RT-qPCR探針Master凍干液設計用于在單管中方便地進行Z大靈敏度和特異性的RT-q聚合酶鏈式反應。該酶混合物基于具有增強的熱穩定性的基因工程RT聚合酶，從而提高了特異性、更高的cDNA產量和對高度結構化的長cDNA片段的改進的效率。凍干物在一個試管中包含RTPCR所需的所有試劑（模板和引物除外），以確保用Z少的移液步驟快速簡便地制備。優質的酶混合物、超純的dNTP和優化的完全反應緩沖液確保了卓越的擴增結果。SCRIPT. RT-qPCR ProbesMaster用于從單鏈RNA模板中擴增雙鏈DNA。在RT步驟中，逆轉錄酶合成與RNA模板互補的單鏈DNA分子（cDNA）。在PCR步驟的第一個循環中，Taq DNA聚合酶合成與cDNA互補的DNA分子，從而產生雙鏈DNA模板。在隨后的循環中，DNA聚合酶以指數方式擴增這種雙鏈DNA模板。在一步RT-qPCR中，在開始反應之前，將RT和PCR的所有組分混合在一個試管中，從而在不打開試管的情況下依次進行。當應用于分析來自多個RNA樣本的單個靶標時，這提供了極大的便利，并將污染風險降至Z低。

艾美捷RT-qPCR探針主凍干物/RT-qPCR master mix（PCR-159S）：

SCRIPT. RT-qPCR 探針主凍干粉：包含預裝的SCRIPT逆轉錄酶、熱啟動聚合酶抗體+、dNTPs（去氧核苷酸三磷酸）、反應緩沖液、MgCl2和穩定劑的凍干粉。PCR級水。

處理：SCRIPT. RT-qPCR 探針主凍干粉以PCR反應管條或96孔板的形式交付，預裝有完整的qPCR主混合物，以干燥、室溫下穩定的格式。這種凍干粉結合了高性能與使用的便利性和穩定性。無需進行冷凍、解凍或在冰上移液。剩余的少量移液步驟Z小化了錯誤或污染的風險。每個小瓶包含進行20 μl RT-qPCR檢測所需的所有組分（除了引物和模板）。要執行檢測，只需將小瓶用引物和RNA模板的混合物填充。

靈敏度：一般可以從10 pg至500 ng的polyA RNA或10 pg至1 μg的總RNA中檢測到目標。即使是更少量的RNA，也可以通過使用高表達的轉錄本成功擴增。

RT-qPCR檢測準備：

1. RNA/引物混合物的準備：將以下組分加入到無核酸酶的微管中，并通過輕輕上下移液進行混合：

2. 變性和引物退火（可選）：請注意：對于表現出高度二級結構的RNA靶標、自互補或交叉互補的引物以及新靶標的初始實驗，特別推薦樣本變性。對于許多標準的RNA和引物組合，即使省略熱處理也不會對結果產生負面影響。將混合物在70°C下孵化5分鐘，然后放置在室溫下5分鐘。

3. 分配主混合物：向每個含有凍干粉的管子或板孔分配20微升(μl)的RNA/引物混合物。

逆轉錄和熱循環：將小瓶放入PCR循環儀中，并啟動以下程序。

1) 建議進行10分鐘的逆轉錄時間，以獲得100至200堿基對(bp)之間的Z佳擴增子長度。更長的擴增子，達到500堿基對，可能需要延長孵化時間至15分鐘。每增加100堿基對，增加3分鐘。Z優溫度取決于RNA的結構特征。對于具有高二級結構的難擴增模板，將溫度提高到55°C。請注意，每個特定的RNA，應調整Z優的反應時間和溫度。