高靈敏度彗星法DNA損傷分析試劑盒（3孔載玻片）

彗星檢測試劑盒（3孔載玻片）是一種單細胞凝膠電泳檢測（SCGE），用于檢測細胞中DNA損傷的快速靈敏測試。其原理是，在器官或組織遭受（如輻射、重金屬等）后，細胞中的單鏈或雙鏈DNA斷裂，將細胞與融化的瓊脂混合并放在玻片上，然后用裂解溶液破壞細胞膜，用堿性溶液解開DNA。最后，對樣品進行電泳，在電場的作用下，正常細胞的大分子DNA遷移較短的距離，完整的DNA保留在細胞核的范圍內，DNA碎片從細胞核中遷移出來，用PI染料染色，在熒光顯微鏡下觀察，完整的脫氧核糖核酸形成圓形或微辮狀；DNA碎片形成彗星狀圖案。根據電泳緩沖液的pH值，可分為中性彗星試驗（pH=8.4）和堿性彗星試驗（pH>13）。中性彗星法主要用于檢測DNA雙鏈斷裂損傷，堿性彗星法具有較高的靈敏度，可用于檢測較少的單鏈和雙鏈斷裂損害。

艾美捷彗星法DNA損傷分析試劑盒（3孔載玻片）：

Cat #: D-AKE3040

Size: 15T

Storage: Stored at 4°C for 6 months, protected from light

彗星法DNA損傷分析試劑盒（3孔載玻片）供應材料和儲存條件：

彗星法DNA損傷分析試劑盒（3孔載玻片）化驗程序：

A.樣品的制備

1.在執行前，準備1xLysis緩沖液、堿性溶液和電泳溶液（見試劑制備）化驗。使用前將所有溶液冷卻至4℃。

2.將瓊脂（低熔點）在水浴中加熱至90-95°C 20分鐘，直到瓊脂液化，然后轉移將瓶子放入設定為37°C的水浴中20分鐘，冷卻并儲存。

3.彗星玻片在37°C下預熱。在Comet Slide上每孔添加100μL瓊脂，形成基底層確保完全覆蓋油井。保持彗星滑道水平，將彗星滑道轉移到4°C溫度下15分鐘。

4.制備細胞樣品，如下所示：

懸浮細胞：以1000g離心細胞5分鐘，并丟棄上清液。用冰冷的PBS洗滌細胞一次，離心并丟棄上清液。最后，將細胞以1-5×105個細胞/mL重懸于冰冷的PBS中。

粘附細胞：通過刮取細胞，輕輕地將細胞從培養皿中去除。將細胞懸浮液轉移到離心管中以1000g離心5分鐘，丟棄上清液。用冰冷的PBS清洗細胞一次，離心并丟棄上清液。最后，將細胞以1-5×105個細胞/mL重懸于冰冷的PBS中。

組織制備：用解剖剪刀將一小塊組織切成塊，加入1-2毫升冰冷的PBS含有20mM EDTA，將組織/細胞懸浮液保持5分鐘而不移動，并將上清液轉移到離心管，避免轉移碎屑。以1000g離心5分鐘，并丟棄上清液。最后將細胞以1-5×105個細胞/mL重懸于冰冷的PBS中。

5.將細胞樣品與瓊脂以1:10的比例（N/N）混合，通過移液管充分混合，并立即轉移75μl/孔以在不干擾基層的情況下完全覆蓋。

6.保持彗星滑道水平，將彗星滑道轉移到4°C的暗室中15分鐘。

7.將彗星玻片水平轉移到容器中預冷的1×裂解緩沖液（約25mL/彗星玻片）中在黑暗中在4°C下持續30-60分鐘。

8.小心地從容器中吸出1xLysis緩沖液，并用預冷的堿性溶液替換（約25毫升/彗星玻片）。將彗星玻片在溶液中浸泡30分鐘，溫度為4℃，黑暗中。

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