AT 550 琥珀酰亞胺酯-高質量胺反應染料

上一篇 / 下一篇 2023-09-26 16:22:31/ 個人分類：生化試劑

AT NHS酯很容易與蛋白質的氨基反應。我們擁有提供各種高質量的胺反應染料，用于標記蛋白質和其他含胺底物。染料的光譜范圍從紫外350nm到近紅外750nm。常用的胺反應試劑是N-羥基琥珀酰亞胺（NHS）酯。NHS酯很容易與含有氨基的化合物反應，在染料和蛋白質之間形成化學穩定的酰胺鍵。然而，氨基必須是非質子化的才能具有活性。因此，必須將溶液的pH調節到非常高的水平，以獲得高濃度的未質子化氨基。另一方面，NHSesterscan還與溶液中的氫氧根離子反應，導致形成不再具有活性的“游離”染料。由于不可避免的水解速率會隨著氫氧根離子的濃度而增加，因此pH值應保持在較低的范圍內。pH 8.3的緩沖溶液已被發現是這些沖突需求之間的一個很好的折衷方案

艾美捷AT 550 琥珀酰亞胺酯：

Cat#：B-CHM502/B-CHM503/B-CHM504/B-CHM505

規格：1 mg

儲存：儲存溫度為-20°C，避光保存。

形態：結晶固體

儲存條件：儲存溫度為-20°C，避光。

穩定性：在適當的儲存條件下穩定至少12個月

AT 550 琥珀酰亞胺酯規格：

MW：包括抗衡離子的染料的分子量，單位為g/mol；M+：染料陽離子的分子量（HPLC_MS乙腈/水0.1vol-%三氟乙酸）；?m：與AT染料NHS酯結合時分子質量的增加；?q：與AT染料NHS酯結合的電荷增加；εmax：最長波長吸收最大值下的摩爾十年消光系數M-1cm-1；CF260=ε260ε/最大值；CF280=ε280ε/最大值

用AT NHS標記蛋白質的建議方案：

AT NHS酯很容易與蛋白質的氨基反應。NHS酯結合的最佳pH范圍是pH

8.0-9.0。在這個pH范圍內，蛋白質的氨基，特別是賴氨酸的氨基，被充分去質子化以進行快速偶聯。

所需材料：

溶液A:PBS緩沖液（磷酸鹽緩沖鹽水，pH 7.4）：將8 g NaCl、0.2 g KCl、1.44 g Na2HPO4-2H2O和0.24 g KH2PO4溶解在1L蒸餾水中。

溶液B:0.2 M碳酸氫鈉溶液，用2 M氫氧化鈉將pH調節至9.0。

溶液C：將20份溶液A與1份溶液B混合，得到pH為8.3的標記緩沖液。將此溶液儲存在密封瓶中，以保持長期穩定性。

溶液D：將1.0 mg NHS酯溶解在50-200 ul無水無胺二甲基亞砜（DMSO）中，或

乙腈。

染料原液的制備與處理

在測定染料儲備溶液的濃度時，我們建議取等量的樣品，用酸化乙醇（0.1體積%三氟乙酸）稀釋，以避免染料聚集，在某些情況下（AT 565和AT 590），避免無色內酯的形成。根據溶劑的質量，這種儲備溶液在室溫下不穩定，必須在20℃下避光保存。

活性分子可能發生水解并失去活性。我們建議盡可能在開始標記反應之前立即新鮮制備染料原液。應當注意的是，諸如DMSO或DMF的溶劑應當不含親核性和/或堿性雜質。這些化合物可以與NHS酯官能團反應，降低偶聯效率。

綴合物制備

蛋白質溶液不能含有任何含胺物質，如Tris、游離氨基酸或銨離子。溶解在胺緩沖液中的抗體應針對溶液A進行透析，并且通過溶液C中描述的步驟實現8.3的期望偶聯pH。

1、為了實現2-3的平均標記度（DOL）（染料與蛋白質的比例），在輕輕搖動的同時，向蛋白質溶液中輕輕添加三倍摩爾過量的活性染料（溶液D）。由于蛋白質和標記試劑之間的反應性不同，可能會發生變化。在反應過程中有必要優化染料與蛋白質的比例，以獲得所需的DOL。必須使用更高比例的NHS酯和蛋白質來提高標記效率，反之亦然。

2、將反應混合物在室溫下避光培養1小時。對于AT565-NHS和AT590-NHS，我們建議在環境溫度下培養18小時以完成反應。