預活化的PE [R-藻紅蛋白]使用說明

藻紅蛋白是從紅藻中分離純化的，具有較強的熒光性、良好的吸光度和較高的量子產率。它在可見光譜區具有很寬的激發和發射范圍。通過使用傳統的標記方法，它可以很容易地與生物素、抗生物素和各種單克隆抗體結合形成熒光探針，用于抗體熒光標記，如熒光顯微鏡、熒光免疫分析、雙或多色熒光分析、癌癥細胞表面抗原檢測、流式細胞術熒光測量、，以及診斷和生物工程技術，例如體內成像應用。活化的藻紅蛋白很容易與抗體和其他蛋白質結合，而不需要化學交聯劑。這些高度純化的藻紅蛋白在結合后保持其光譜特征。用4-（N-馬來酰亞胺甲基）環己烷-1-羧酸琥珀酰亞胺基（SMCC）處理活化的hycoerythrin，該琥珀酰胺基與賴氨酸殘基反應，使馬來酰亞胺基團與偶聯伴侶蛋白的游離硫醇反應。當與含硫醇的靶標混合時，可以直接偶聯，無需進一步預處理。

艾美捷預活化的PE [R-藻紅蛋白]：

Cat #: B-CHM305

Size: 1 mg

Storage: Store at 4°C, protected from light

預活化的PE [R-藻紅蛋白]特性：

形式：液體

光譜特性：Ex/Em=450-500納米/575±5納米

純度：Amax/A280>5.0

運輸和儲存

儲存條件：4°C避光保存。不要凍結。

穩定性：在適當的儲存條件下穩定至少6個月。

預活化的PE [R-藻紅蛋白]使用說明：

1.抗體修飾

1） 將抗體修飾試劑（DTT/TCEP）溶于ddH20中，制備2mg/ml抗體修飾緩沖液。

2） 使用PBS緩沖液將待標記抗體的濃度（純度>90%）調節至約5-10 mg/ml。向每毫克抗體中加入10μl抗體修飾緩沖液，輕輕混合。在室溫下攪拌混合物60-90分鐘。

3） 反應完成后，將混合物轉移到離心過濾管中，并加入MES緩沖液。離心過濾器多次以除去過量的抗體修飾緩沖液。過濾器中收集的溶液是經修飾的抗體，應將其調節至1-5mg/ml的濃度。

2.活化的R-藻紅蛋白與抗體的結合

1） 使用MES緩沖液將活化的R-藻紅蛋白的濃度調節至5 mg/ml。為了獲得R-PE的準確重量，我們建議使用R-PE的消光系數進行測量（[R-PE]=0.1245×

A565，其中[R-PE]是以mg/ml為單位的濃度，A565是565nm處的吸光度，優選在0.3-0.8的范圍內）。

2） 將修飾的抗體與活化的R-藻紅蛋白以1:3的質量比混合（每mg修飾的抗體3 mg活化的R藻紅蛋白）。在室溫下避光反應2小時。

3） 將NEM溶解在無水二甲基亞砜（DMSO）中，制備12.5 mg/ml溶液（0.1 M）。在步驟2）的反應混合物中，每毫克抗體加入5μl-NEM溶液，以阻斷任何剩余的活性基團。

4） 將步驟3）中的溶液轉移到離心過濾管中，并通過重復離心去除阻塞緩沖液。

5） 將標記的抗體分成等分，添加適當的防腐劑，并在-20°C下儲存以備將來使用。

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