PicaGreen dsDNA定量試劑盒，分子生物學技術靈敏檢測

PicaGreen dsDNA定量試劑盒*2000次*試劑盒可用于在存在RNA、蛋白質和常見污染物的情況下定量測量樣品中的雙鏈DNA。PicaGreen允許對低至低ng/mL的dsDNA進行定量。 試劑盒包含PicaGreen染料、緩沖液和用于測量的DNA標準品。它與熒光計、熒光板讀數器、比色杯和微體積熒光計兼容。

艾美捷 Biogradetech PicaGreen dsDNA定量試劑盒：

中文名稱：PicaGreen dsDNA定量試劑盒*2000次*

英文名字：PicaGreen dsDNA Quantification Kit *2000T*

Biogradetech貨號：B-CHK001-1mL

規格：1mL

保存建議：PicaGreen dsDNA定量試劑盒*2000次*儲存條件：4°C&室溫避光。 穩定性：在適宜條件下可以儲存6個月。

在分子生物學的試驗過程中,PicoGreen dsDNA 定量試劑盒是熒光檢測雙鏈 DNA 并進行定量的一種產品,這種方法非常靈敏。常用于分子生物學技術中的:cDNA 文庫的構建;用于亞克隆的 DNA 片段純化及應用,比如進行 DNA 定量、產物擴增和引物的進一步檢測。 PicoGreen 定量檢測方法簡單、方便,被多家生物制品廠所選擇,成為生物制品殘留DNA 檢測的標準。

操作步驟:

1、試劑制備

PicaGreen dsDNA (Component A )(定量試劑是以 1mL 的濃縮液形式保存在無水的 DMSO(二甲基亞砜)中。實驗當天,配制 2XPicoGreen 試劑的操作溶液,用 1xTE(Component

B)按 1:200 的比例稀釋濃縮液。如果要準備足夠的操作溶液測定 20 個樣品,可在 20mL1x TE(Component B)中加入 100μLPicaGreen dsDNA(Component A ) 定量試劑。由于試劑容易吸附到玻璃表面,要在塑料容器中配制。PicaGreen 試劑(Component A )見光易降解,所以應將配好的溶液用錫箔包住或放置暗處避光保存。溶液 在配制好數小時內使用,以保證 結果。

2、DNA 標準曲線

2.1 預備 1μg/mLdsDNA(Component c)或貯存液于 1x TE 中。根據在 1cm 光程長度的比色杯中 A260nm 時的吸光度確定 DNA 濃度;相應于 μg/mLdsDNA 溶液 A260=0.02。盡管任何純化的 dsDNA 制劑都可用來做標準曲線,但常用的是小牛胸腺 DNA。 用跟被檢測的樣品相似的 DNA 做標準曲線,用或長或短的線型 DNA 片段測定相近大小的酶切片段;質粒用于測定質粒 DNA。然而大部分線狀 dsDNA 分子,不管其片段長度大小,都會產生大致相等的信號。PicaGreen 試劑測定法在通常污染核酸制劑的幾種復合物存在的條件下仍能保持線狀,盡管信號強度可能受到影響。因此,為了得到有效的對照處理,被用來做標準曲線的 dsDNA 溶液要用和實驗樣品相同的方式來處理,并且應該包含相同的可能存在的污染物。

2.2 要產生從 0.5ng/mL 到 500ng/mL(見表 1)單重復 8 個點的標準曲線,在 2X 終濃度下配制一系列的 DNA 溶液,混合相同體積的 2XDNA 和 2XPicaGreen 操作溶液,放入10×10mm 比色杯中。混合相同體積的 1XTE 和 2XPicaGreen 操作溶液以備空白對照。避光于室溫下放置 2-5 分鐘。

表1：用 10×10mm 比色杯時 DNA 標準曲線

2.3 孵育后用合適的熒光計測量樣品熒光值。選擇藍色激發光,用熒光值 的樣品校正儀器。

2.4 測量剩余樣品的熒光值。不同的微型熒光計將給出一個直接的濃度讀數,數據可以用來產生 DNA 濃度的標準曲線,下面以 TBS-380 微型熒光計為例。

3、樣品分析

3.1 用 1X TE 稀釋未知 DNA 樣品至需要的體積(10×10mm 比色杯需 1.0mL,微量檢測皿需 25-100μL)。對樣品高度稀釋可以確保任何污染物都被 限度地沖淡。然而也要避免取樣體積太小而無法 吸取的情況。去除樣品中 RNA 和 ssDNA 參照 4 部分。

3.2 在每個樣品中加入 2XPicaGreen 試劑的操作溶液(3.1 節準備),混合好,將混合物移入合適的比色杯,避光于室溫下放置 2-5 分鐘。3.3 可以對樣品進行不同的稀釋處理重復測定以確保結果的準確性。

4、去除樣品中單鏈核苷酸

當 ssDNA 與 dsDNA 等摩爾濃度時,后者的測定受前者的干擾很小。前者濃度 10 倍于后者時,對熒光信號的干擾也不過 10%。但當 DNA 濃度低時,ssDNA 能產生較大干擾在高濃度時,由 RNA 結合 PicaGreen 試劑產生的熒光值用 RNA 酶處理樣品可消除。RNA 酶 A、酶 T1 結合核酸酶 S1 能除去所有單鏈核酸,從而保證樣品熒光值是由 dsDNA 產生。(具體做法請查閱相關的參考文獻)

https://www.amyjet.com/products/B-CHK001-1mL.shtml