NGS Normalizer Kit（NGB-61900）使用前注意事項

NGS Normalizer Kit（NGB-61900）：去除引物二聚體；同時清理和規范PCR產品；使用離心法快速（不到20分鐘）、高通量且易于處理；足夠的洗脫體積（100μL）用于重復或未來的測定；非磁珠凈化。

艾美捷NGS Normalizer Kit允許高通量NGS文庫PCR擴增子NGS文庫PCR產物濃度的凈化和標準化（~5±1 ng/μL）。清理去除了所有PCR副產物，包括引物、二聚體、酶和未合并的核苷酸。純化基于96孔柱色譜法，使用Norgen的專有樹脂作為分離基質。金額每個96孔中的Norgen矩陣被優化為具有有限的結合能力，因此每個孔可以洗脫相等濃度的PCR產物。

該過程包括首先添加3卷將緩沖液SK加入到PCR產物中，然后將混合物裝載到96孔標準化上盤子然后用所提供的洗滌溶液A洗滌結合的PCR擴增子，以便除去任何殘留的雜質，并用洗脫緩沖液B洗脫純化的PCR擴增子。純化和標準化的文庫PCR擴增子可以用于NGS工作流程和其他測序應用。

NGS Normalizer Kit使用前注意事項：

?應使用變速離心機以獲得最大的套件性能。如果變量高速離心機是不可用的，可以使用固定速度的離心機，但減少可以觀察到產率。

?通過添加90 mL 96-100%乙醇制備工作濃度的洗滌溶液a（由用戶提供）至供應的含有濃縮洗滌溶液的瓶子

A.這將提供128毫升的最終體積。瓶子上的標簽有一個盒子，可以檢查以表明已添加乙醇。

1.將3體積的緩沖液SK直接添加到包含文庫PCR延伸的每個孔中產品（例如：將60μL緩沖液SK添加到20μL文庫PCR產物中）。混合方式上下吸移或用膠帶渦旋密封板并短暫離心盤子。

2.將96孔歸一化板放置在所提供的96孔收集板的頂部。

3.將混合物加入96孔正火板的孔中。

4.以最大速度或3200 x g（約4000 RPM）離心組件2分鐘。

5.丟棄流通。重新組裝96井正火板和96井收集板。

注：確保每個孔中的所有裂解物都已進入底部盤子如果整個裂解液體積未通過，則再離心2分鐘。

6.將400μL洗滌溶液A涂抹在96孔正火板的每個孔上。以最大速度或3200 x g（約4000 RPM）離心組件2分鐘。

注：確保每個孔中的所有裂解物都已進入底部盤子如果整個裂解液體積未通過，則再離心2分鐘。

7.丟棄流通。重新組裝96井正火板和96井收集板。

8.重復步驟6和7，再次清洗盤子。

9.以最大速度或3200 x g（約4000 RPM）離心組件15分鐘以使板完全干燥。

10.在紙巾上輕輕拍打96孔正火板的底部。

11.堆疊96孔正火板和96孔洗脫板（提供）。

12.向96孔板的每個孔中加入100μL洗脫緩沖液B。

13.以200 x g（~1000 RPM）離心組件1分鐘，然后離心3200 x g（約4000轉/分）持續4分鐘。

DNA的儲存：

使用提供的膠帶密封洗脫板。純化的DNA樣品可以在–20°C下儲存幾天。建議將樣品放置在–70°C的溫度下用于長期儲存

來源：https://www.amyjet.com/products/NGB-61900.shtml