異育銀鯽Toll 樣受體3 的cDNA 序列分析與蛋白質高級結構預測

摘要: 利用RT2PCR、RACE 及克隆等方法獲得了異育銀鯽Toll 樣受體3 (cagTLR3) 基因全長cDNA 序列。該cDNA 全長3170 bp , 5′端非編碼區181 bp ; 3′端非編碼區283 bp ; 開放閱讀框(ORF) 2706 bp ,編碼901 個氨基酸。經序列同源性分析顯示,其編碼的氨基酸序列與金魚、斑馬魚、斑點叉尾　、虹鱒和紅鰭東方　有較高的相似性,其相似性分別為92 %、88 %、79 %、75 %和72 %,說明TLR3 在長期的進化中具有較高保守性。TLR3 全長序列起始21 個氨基酸殘基為信號肽;50 至695 個氨基酸殘基間包含15 個富含亮氨酸的重復序列(LRR) ; 704 至726 個氨基酸殘基為跨膜區( TM) ;754 至897 個氨基酸殘基為與白介素- 1 受體高度同源的區域( TIR) 。將異育銀鯽TLR3 與人和斑馬魚胞內TIR 結構的氨基酸比對后發現, Phe728、Leu738、Tyr756 與Arg736 在TLR3 的信號轉導及胞內定位過程中起到關鍵作用。異育銀鯽TLR3 胞外配體結合域的三維結構呈U 型,與人TLR3 的相應結構十分相似,在N 端具有1 個二硫鍵,C 端有2 個。因LRRs 上的插入序列和14 個糖基化位點,異育銀鯽TLR3 胞外配體結合域內表面的大量β2折疊結構呈平坦的平面。