細胞裂解液對蛋白質定量方法的影響

[摘　要]　目的: 觀察不同細胞裂解液對B radfo rd 法和b icinchon in ic acid (BCA ) 法的影響, 以確定適合蛋白質組學研究中細胞全蛋白含量的定量方法。方法: 采用B radfo rd 法和BCA 法測定牛血清白蛋白(bovine serum album in,BSA ) 樣品溶液, 樣品BSA 溶液分別由雙蒸水和不同裂解液(熒光差異雙向凝膠電泳裂解液、三種傳統雙向凝膠電泳裂解液) 配制; 然后, 采用這兩種方法測定上述裂解液所提取的細胞全蛋白樣品; 采用Bradfo rd 法定量反復凍融、不同比色杯和不同時期標準曲線下的樣品。結果: 各細胞裂解液對B radfo rd 法均有顯著性影響, 使所定量的BSA 濃度普遍偏高1. 2 至2倍, 但定量值可隨著加樣濃度的增加而增加(r= 0. 989～ 0. 996, P < 0. 05) ; 各裂解液對BCA 法也均有顯著性的干擾, 多數定量結果超出儀器讀數范圍; 對于同批全蛋白溶液樣品,BCA 法的定量結果與B radfo rd 法相比可有千倍差異; 反復凍融后蛋白濃度變化統計學上無顯著性差異, 但有下降趨勢, 不同比色杯和不同時期標準曲線對B radfo rd 法無顯著影響。結論:B radfo rd 法是蛋白質組學中細胞全蛋白定量的較適方法, 但需根據具體實驗進行優化。