麻瘋樹脂酶全長基因克隆、表達及其蛋白質結構預測

摘要 脂酶(Lipase, EC3.1.1.3)是普遍應用于皮革、飼料及生物柴油工業的工業酶制劑, 具有廣泛的應用價值。目前對植物來源的脂酶研究較少。本研究用在生物柴油中具有應用前景的油料植物——麻瘋樹(Jatropha curcas)作為研究對象, 克隆了該物種的脂酶基因(JcLIP)。通過多序列比對并結合物種的親緣關系設計了具有較高特異性的簡并引物, 通過使用RT-PCR和RACE技術, 最終獲得了麻瘋樹脂酶基因的全長序列并成功地在大腸桿菌中表達, 酶活測定結果表明, 麻瘋樹脂酶在大腸桿菌中表達在包涵體中, 但是能產生具有活力的蛋白質, 酶活約為0.8 U.mL-1。結構預測和比較表明, JcLIP蛋白質具有脂酶的結構核心和催化活性中心, 而在非核心區具有較毛霉脂酶更多的插入和隨機卷曲, 這可能是決定二者之間酶活差異的重要原因。