建立并優化胃潰瘍復發大鼠蛋白質組分析的雙向凝膠電泳技術

摘要 目的: 建立并優化白細胞介素1β致大鼠乙酸性胃潰瘍復發模型大鼠蛋白質組分析所需的雙向凝膠電泳技術。方法: 實驗于2005- 04/2006- 02 在中南大學湘雅醫院中西醫結合研究所實驗室、衛生部腫瘤蛋白質組學重點實驗室完成。①選用成年SD 大鼠60 只, 雌雄不拘。按隨機數字表法分為2 組: 對照組、模型組, 每組30 只。采用乙酸復制胃潰瘍動物模型及白細胞介素1β復制胃潰瘍復發動物模型, 正常對照組施予相同的飲食方案。②兩組大鼠于復發模型建立成功后24 h 禁食,48 h 后處死, 收集胃組織, 在組織樣品離體后立即以冰鹽水沖洗以去除組織液和血細胞, 并于30 min 內入液氮速凍, 采用化學和高速機械法進行胃組織裂解。采用Amersham Bios ciences 公司專門針對蛋白質組學研究中的蛋白質抽提方法設計的2DQuant Kit 定量試劑盒, 從而實現準確的蛋白質定量。為了盡量可能多分離蛋白質, 選擇pH 值范圍( pH 3~10) 的固相線性24 cm 干膠條和125 g/L 的均勻SDS 聚丙烯酰胺凝膠, 采用初始電壓為2.5 W/ 膠電泳30 min, 然后以17 W/ 膠恒功率電泳, 直至溴酚藍指示線到達凝膠底邊處停止電泳。結果: 以固相pH 梯度- IPG 膠條(pH 3～10)進行第一向等電聚焦,以SDS 均一膠(12.5%)的垂直電泳為第二向,成功地得到了兩組大鼠胃組織斑點分布均勻、數目較多的雙向凝膠電泳圖譜。結論: 通過對蛋白質雙向凝膠電泳的建立及技術的優化, 獲得了適合于研究胃潰瘍復發蛋白質組差異表達。