不同上樣方式對蛋白質組雙向電泳圖譜質量的影響比較

摘要　蛋白質組技術難點之一是如何獲取盡可能多的細胞或組織的蛋白信息. 雙向電泳蛋白斑點數目直接反映了實驗蛋白質組信息的完整性. 除樣品制備外,蛋白上樣方式對雙向電泳圖譜的質量和完整性有直接的影響. 實驗論文從以下3 個方面考察不同的蛋白上樣方式對雙向電泳圖譜的影響;即:水化上樣與杯上樣;一次上樣與重復上樣;以及酸性端加樣與堿性端上樣. 實驗結果發現;蛋白上樣量較大時,杯上樣方式的圖譜斑點數目較水化上樣方式明顯增多;樣品蛋白濃度較高時,稀釋多次上樣明顯優于一次性濃縮蛋白上樣;蛋白裂解液(MCF27 乳腺癌細胞) 在酸性端加樣對偏堿性蛋白的分離未發現明顯優勢. 相反,在等電聚焦伏小時(Vh) 足夠的前提下,堿性端加樣對偏堿性端蛋白反而有利,表現為斑點數目較多,而且等電點方向拖尾減輕. 實驗結果對提高雙向電泳的質量以及相關蛋白質組信息的完整性提供了有益的技術參考.