N- 端加flag 標簽增加P21Cip1/WAF1蛋白質穩定性

【摘要】背景與目的: 已知細胞分裂周期抑制因子P21 通過蛋白酶體通路降解,其氨基端的泛素化可能參與了這一過程。Flag 為一蛋白標簽,常用于標記重組蛋白質,以便對靶蛋白進行生物學功能分析。本文旨在研究N- 端加flag 對P21 蛋白質穩定性的影響。材料與方法: 建立穩定表達外源flag-p21 蛋白質的NIH3T3 細胞株,應用蛋白印跡法(WB) 檢測NIH3T3 細胞表達的flag-p21 ,并比較其與內源P21 蛋白質半衰期的差異;確定阻斷蛋白酶體水解通路對其降解過程的影響。結果: NIH3T3 細胞表達的內源P21 蛋白質半衰期約30 min , 而同一細胞表達的flag-p21 融合蛋白半衰期則明顯延長; 用抑制劑MG-132 阻斷蛋白酶體水解通路后, P21 蛋白質的量明顯增加,但同一細胞內表達的flag-p21 量卻無明顯改變。結論: N- 端加flag 標簽可增加P21 蛋白質的穩定性。在對P21 蛋白質的生物學功能進行研究時,應考慮N- 端加flag 對P21 泛素化- 蛋白酶體依賴的降解過程的影響。