生化工程快報 【總第12-18期】

【總第12-18期】

1 樣品置換層析在復雜混合物中純化蛋白質和多肽的應用組織或細胞懸浮液、血漿和其它體液通常是蛋白質組學分析主要對象，這些生物材料是非常復雜的，一方面高豐度蛋白含量極高，另一方面低豐度蛋白的濃度通常在ng/mL范圍內，增加了從中尋找潛在生物標志物的難度。樣品置換層析（Sample displacement chromatography，SDC）利用了樣品中不同組分的相對結合力的差異可實現分離目的。在樣品過量加載條件下，具有較高的結合力的組分優先結合于層析介質的配體上，而具有較低的親和力的組分可以從柱中移除。SDC可以應用于疏水相互作用、離子交換和親和層析等多種層析模式，涉及產品包括兔肌鈣蛋白、凝血因子、血管緊張素-II-生成酶、胰蛋白酶抑制劑、凝血酶、單克隆抗體等藥用蛋白質，特別是在疏水層析純化血漿蛋白和在離子交換層析純化維生素K依賴性
凝血因子和抑制劑過程中，應用SDC改善純化效果已經放大到生產規模。樣品置換色譜是一種重現性極好的復雜混合物分離方法，能夠快速有效地純化含有多種蛋白質和肽的混合物，而且可以與質譜分析相結合，在宏觀和微觀尺度上對蛋白質和多肽進行分析（孔博士供稿）。參考文獻： Sample displacement chromatography as a method for purification of proteins and peptides from complex mixtures. J Chromat A, 2012, 1239: 1–9.
2 差示掃描量熱法(DSC)在層析分離抗體研究中的應用
DSC是上世紀60年代出現的一種基于程序控溫度測量輸入到物質和參比物功率差和溫度關系的分析方法,根據測量方法不同可分為功率補償型和熱流型。蛋白結構穩定性對其生物活性十分關鍵，研究環境因素(如pH、溫度和離子強度等)對蛋白質結構和生物活性的影響對分離純化工藝研究十分關鍵，如Protein A親和層析中，許多抗體及其它蛋白在低pH洗脫條件下不穩定，導致在洗脫過程中或之后發生沉淀(包括高濃度導致的聚集現象)。為改善Protein A層析工藝中載量和經濟性，需系統考察抗體在洗脫緩沖液中的穩定性。DSC能用于鑒定抗體的pH穩定性并確定何種添加劑可改善低pH條件下抗體穩定性。通過提高低pH洗脫緩沖液中抗體穩定性可增加Protein A層析柱上樣量，減少昂貴的Protein A介質用量。DSC結果表明在Protein A親和柱洗脫緩沖液(檸檬酸)中添加Mannitol可顯著提高抗體穩定性，大幅度提高介質處理量(從2mg/ml gel提高到15mg/ml gel)并維持抗體的穩定性，從而大幅度提高純化效率并進一步降低了抗體的層析分離成本。（黃博士供稿）
3 多肽類藥物沖刺“重磅炸彈”新貴
在重組藥物領域中多肽類藥物由于其毒性低、特異性高和分子量小等自身獨特的優勢，成為患者的最佳選擇。隨著制造工藝和給藥系統的改進，多肽類藥物從上世紀70年代諾華的賴氨加壓素上市起，已經取得了迅猛發展。據全球肽治療基金會的報告顯示，在過去的幾十年，進入臨床開發的多肽類藥物數量不斷增加，上世紀90年代年均為9.7種，2000-2008年間增加到16.8種。據預測，全球多肽類藥物市場將會從2003年的53億美元增長到2013年的115億美元，復合年均增長率為8.1%。在全球醫藥市場上，數種多肽類藥物已經取得了商業上的成功，其銷量已經達到或者接近“重磅炸彈”級藥物的銷售水平。6種多肽藥物新貴包括醋酸格拉替雷、醋酸奧曲肽、醋酸戈舍瑞林、甲狀旁腺激素復泰奧和醋酸亮丙瑞林，2011年其銷售額超過88億美元。從國內情況來看，從2011年開始，多肽類藥物獲得更多資本的青睞。另外，隨著原料成本降低、規模效益和分離技術的進步，化學多肽合成特別是固相多肽合成成本顯著下降，我國化學合成多肽類藥物市場也將迎來新一輪擴容。（黃博士提供）

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