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旭月(北京)科技有限公司(http://xuyue.net),是2005年創立于中關村科技園區的國家高新技術企業。創始人許越先生,曾服務于美國航空航天局NASA,是現代“非損傷微測技術(NMT)”奠基人,動態分離子組學(imOmics)創始人,NMT產業化倡導者,美國揚格公司(http://youngerusa.com)現任總裁。
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Food Energy Secur農科院作物所:NMT發現E3泛素連接酶基因TaPUB15增強了水稻在鹽脅迫下排鈉保鉀的能力
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下一篇 2021-01-28 14:47:37
NMT作為生命科學底層核心技術,是建立活體創新科研平臺的必備技術。2005年~2020年,NMT已扎根中國15年。2020年,中國NMT銷往瑞士蘇黎世大學,正式打開歐洲市場。

基本信息
主題:NMT發現E3泛素連接酶基因TaPUB15增強了水稻在鹽脅迫下排鈉保鉀的能力
期刊:Food and Energy Security
影響因子:5.242
研究使用平臺:NMT植物耐鹽創新平臺
標題:TaPUB15, a U-Box E3 ubiquitin ligase gene from wheat, enhances salt tolerance in rice
作者:中國農業科學院作物研究所景蕊蓮、毛新國、李巧茹
檢測離子/分子指標
Na+、K+
檢測樣品
2周齡水稻幼苗(轉基因、WT)根分生區(距根尖100 μm根表上的點)
植物U-box(PUB)E3泛素連接酶在對環境脅迫和激素信號的響應中起著至關重要的作用,但在小麥(Triticum aestivum L.)中對其了解甚少。我們鑒定了一個U-box E3泛素連接酶基因TaPUB15,它在小麥栽培品種中是保守的。TaPUB15在多種組織中表達,且根部的表達量遠高于其他組織。鹽、脫落酸、4℃和聚乙二醇(PEG)誘導TaPUB15的轉錄。TaPUB15-D的過表達使轉基因水稻的耐鹽性得到改善,同時轉基因水稻的根也增多。離子通量測定表明,轉基因水稻植株的耐鹽性得到改善,在鹽度脅迫下保持較低的Na+/K+比值。基因表達測定表明,相對于野生型,轉基因水稻中一些鹽脅相關基因顯著上調。轉基因水稻的這些結果也在轉基因擬南芥中得到了驗證。我們的數據表明,TaPUB15在提高作物植物的耐鹽性方面起著至關重要的作用,是未來促進耐鹽小麥育種的寶貴基因資源。
離子/分子流實驗處理
100 mM NaCl處理1 h
為了更好地了解Na+和K+的動態變化,使用非損傷微測技術(NMT)來監測轉基因和WT水稻根尖的Na+和K+流速。100 mM NaCl處理1 h后,所有測試的幼苗均顯示出Na+外排。Na+在轉基因水稻中的外排速率遠高于WT(圖1a)。同時,轉基因水稻幼苗顯示出K+內流,野生稻幼苗顯示出K+外排(圖1b)。因此,TaPUB15-D在水稻中的過表達明顯增加了在鹽脅迫下保K+和排Na+的能力。較低的Na+/K+比值確保轉基因植株在高鹽度條件下具有更好的耐鹽性。

圖1. 轉基因水稻在鹽脅迫下Na+和K+的流速變化情況
其他實驗結果
3個TaPUB15同源基因均高度保守。
TaPUB15-D定位在細胞核和細胞質中。
TaPUB15在幼苗根系表達量最高,其次是幼苗葉片、抽穗期根系和萌發期和幼苗期的根基部。在抽穗的節、莖和旗葉中表達量最低。
在250 mM NaCl、50 μM ABA和4°C低溫處理下,TaPUB15被強烈激活,但在16.1% PEG處理下TaPUB15被激活程度較低。
TaPUB15-D過表達導致轉基因水稻的根更長、更多。
TaPUB15-D在水稻中的過表達增強了其耐鹽性。
轉基因株系中OsP5CS1的轉錄水平與WT相比增加了近4倍。鉀轉運基因OsHKT1;1的表達被鹽脅迫顯著誘導。
TaPUB15-D的過表達減少了Na+的積累,使水稻轉基因株系在鹽堿條件下保持相對較低的Na+/K+比值。
TaPUB15-D的過表達增強了轉基因擬南芥的耐鹽性。
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