雜質的結構確證在藥物研發中的作用

眾所周知，在藥物的研發和生產過程中，雜質的控制是事關藥物質量的關鍵事項，其中雜質的結構確證對藥物質量控制和藥物合成工藝及生產工藝的改進具有重要的作用。結構確證是指采用物理或者化學的方法對所制得的化合物進行結構分析，根據得到的數據和結構信息推論或者驗證化合物的結構。結構確證研究是藥物研發的基礎，是保證藥學其他方面的研究、藥理毒理和臨床研究能否順利進行的決定性因素。

合成路線也為化學結構的確證提供了進一步的線索。美國FDA關于原料藥制備工藝的指導原則就指出，最終產物分子是如何從起始原料反應而生產的，以及合成過程中對各步反應變化的描述，都有助于對結構分析數據的解析和確證。如一種產物最終立體構型可能與起始原料有關，也可能是通過立體專屬性反應得到的，或是通過合成中間體的拆分得到的，對合成路線的了解將為我們判斷哪一種可能性是正確的提供依據。

研究復方鹽酸替利定口服液主要雜質的結構和產生的原因，提高復方替利定口服液的質量^[1]。方法是通過LC-MS、IR和H-NMR檢測分析其可能的結構并通過分離、合成等方法對雜質結構進行確認，從而在藥物合成工藝上作出相應改進，減少雜質的含量。結果按照選定方法，獲得復方鹽酸替利定口服液三個主要雜質(順式替利定、反式去甲替利定和順式去甲替利定)，并與LC-MS、IR、H-NMR結果一一對應。以此依據在合成工藝方面做出了相應改進，減少了鹽酸替利定原料雜質的含量，從而提高了復方替利定口服液的質量。研究發現該研究提高了鹽酸替利定原料的純度，進一步對提高復方鹽酸替利定口服液的質量具有一定價值。

藥物中存在的無治療作用、或影響藥物的穩定性和療效、甚至對人體健康有害的物質為雜質。雜質分析方法的選擇直接關系到雜質測定結果的專屬性與準確性，因此，在進行雜質研究時首要問題是選擇合適的雜質分析方法。美迪西的分析化學和純化分離團隊為客戶提供高質量的分析和純化分離服務，可以利用HPLC等各種技術分離監管起始原料、中間體、API和藥物產品中的雜質，并采集完整的1D/2D NMR、LCMS、EA、HRMS、IR、UV等數據，對分離出來的雜質進行結構鑒定等。

總之對推測出的雜質結構，可以通過以下方式進一步對結構進行確證。

（1）根據質譜推斷的結果，尋找相應的對照品、雜質定位液進行比對；

（2）若無對照品、雜質定位液，對于相對穩定的降解雜質，可以通過半制備法，制備少量的目標雜質，用微量核磁管，采用較高分辨率的核磁光譜儀進行結構確證；

（3）對于無法通過半制備方法獲得的降解雜質，可以通過降解反應，提高該雜質的含量，然后通過一些技術測定其核磁數據，進行結構確證。

如有研究者通過破壞試驗，追蹤吉非替尼的降解產物，并對氧化雜質進行合成和定性定量分析^[2]。其結構經 1 H NMR、13C NMR和MS確證為4-[（3-氯-4-氟）苯胺基]-6-[3-（嗎啉-4-基）丙氧基]-7-甲氧基-1-氧代喹唑啉（氧化雜質A）。通過調節流動相配比和pH值，建立了特異性檢測吉非替尼片中氧化雜質的HPLC條件。使用C18色譜柱，以乙腈∶1%乙酸銨溶液（用冰乙酸調至p H 6.0）（38∶62）為流動相，檢測波長253 nm。氧化雜質A在0.52.0μg/ml范圍內線性關系良好，定量限為0.15μg/ml。研究發現該法能高效準確地測定吉非替尼片中的氧化雜質含量，可為其質量標準的建立提供參考。

雜質指的是在原料藥的制備過程中，由原料、試劑、溶劑或副反應引入的與終產品結構不同的任何成分。雜質與藥品的質量、安全和穩定性密切相關，對藥物中的雜質進行制備和結構確證可以幫助了解雜質產生的途徑，為藥物合成工藝路線和生產工藝的改進提供依據，因而至關重要。

[1] 復方鹽酸替利定口服液中主要雜質的結構確證與工藝改進[J].

[2] 吉非替尼片中氧化雜質的結構確證及HPLC法測定[J].