枯草桿菌62磷酸葡萄糖酸脫氫酶的分離純化及部分性質研究

摘要:采用DEAE2Sepharose 離子交換層析,Blue2Sepharose CL26B 特異結合層析和Sephadex G2200 凝膠過濾技術,對枯草芽孢桿菌中的62磷酸葡萄糖酸脫氫酶進行了分離純化. 純化倍數為112. 3 倍,比活為1. 46 U/ mg ,回收率為8. 2 %. 純化酶液經聚丙烯酰胺凝膠電泳檢驗為單一帶. 測得全酶相對分子質量為107kD ,具有兩個分子量相同的亞基,亞基相對分子質量為51kD. 最適pH 值為8. 0 ,最適溫度為30 ℃,對熱不穩定. 以62磷酸葡萄糖酸和NADP+ 為底物,其Km 值分別為Km1 ( NADP + ) = 19. 8μmol/ L 和Km2 ( 62GPA) = 22. 6 μmol/ L. 在5 mmol/ L～50 mmol/ L濃度范圍內,Mg2 + ,Ca2 + 和Mn2 + 對酶有激活作用, Fe3 + 和Cu2 + 對酶有抑制作用, K+ ,Na + ,Cl - ,NO -3 , SO -4 對酶幾乎沒有影響. 用PMSF , TNBS ,NBS ,DTT 和BrAc 對酶進行修飾,實驗結果表明,絲氨酸、蘇氨酸、賴氨酸和組氨酸殘基可能是該酶活性中心的功能基團.