獸藥殘留檢測技術--樣品前處理技術

　　內容摘要：樣品的前處理包括提取、凈化、濃縮和衍生化。設計樣品處理方法必須考慮到待測組分的理化性質、存在狀態、樣品基質的化學組成、可能的干擾物質類型、處理方法對藥物穩定性的影響和采用的測定方法。

　　動物性食品中獸藥殘留的特點是樣品中殘留物水平很低，樣品基質復雜，干擾物質多，不易從樣品中分離、純化殘留物。因此，獸藥殘留分析是針對復雜生物樣品基質中痕量組分的分析技術。樣品的分離純化是獸藥殘留分析中最費時和勞動強度最大的步驟。傳統的樣品制備技術如液一液分配等仍在廣泛使用，同時一些新的樣品分離純化技術也不斷被引入到獸藥殘留分析中。免疫親和色譜技術、分子印跡技術、基質固相分散技術、超臨界流體萃取(sFE)等是殘留分析中有效的分離純化方法，目前是獸藥殘留分析領域中的研究熱點。

　　樣品的前處理包括提取、凈化、濃縮和衍生化。設計樣品處理方法必須考慮到待測組分的理化性質、存在狀態、樣品基質的化學組成、可能的干擾物質類型、處理方法對藥物穩定性的影響和采用的測定方法。經典的樣品前處理方法如索氏提取、液液萃取，由于進行多次重復操作，往往需要花費大量時間，同時涉及使用會造成環境污染的大量有機溶劑，由于被測目標物質的濃度越來越低，穩定性隨時空變化，給分析檢測帶來了一定困難。近年來發展較快的方法主要有超聲輔助提取 (Sonication—assist，ed Extraction，SAE)法、固相萃取(solid Phase Extraction，SPE)法、基質固相分散技術(Ma—trix solid—pllasc-dispersion，MSPD)、超臨界流體萃取(Supercritical F1uid Ex—traction，SFE)等。

　　1.超聲輔助提取法

　　該技術在1 96 7年由Johnson等提出SAE提取的作用有兩方面：通過空化作用使分子運動加快;同時將超聲波的能量傳遞給樣品，使組分脫附和溶解加快。SAE操作簡單、一次可以同時提取多個樣品，其提取時間短、速度快、提取效率高，因此廣泛應用于化學化工，醫療，藥物殘留分析等領域中。

　　2.固相萃取法

　　固相萃取(Solid Phase Extracti‘on，sPE)是一種應用較早的樣品處理技術，由液固萃取和柱液相色譜技術相結合發展而來的[z～·引。與傳統的液液萃取法(Liquid Liquid Extracl：ion，LLE)相比，SPE具有回收率高、分離效果好、操作簡單、省時省力等優點[引。由于SPE是一種柱色譜分離過程，分離機理、固定相和淋洗溶劑的選擇等與高效液相色譜類似，目前用于HPLC的填料幾乎均可用于SPE。但sPE的填料一般專為樣品處理設計，粒徑大于HPLC填料，其柱效遠低于HPLC色譜柱。SPE柱的種類有正相、反相、離子交換柱和吸附樹脂柱。正相SPE柱的填料主要為硅膠、氧化鋁、硅鎂吸附劑等;反相柱填料主要為c-8、氰基鍵合柱(cN)。sPE操作步驟包括固定相活化、樣品上柱、洗滌和洗脫四個部分，其中加到萃取柱上的樣品量取決于萃取柱的尺寸、類型、待測組分的保留性質以及待測組分于基質組分的濃度等因素。

　　通過固相萃取凈化與氣質聯用儀測定動物組織中鹽酸克倫特羅的殘留量，對鹽酸克倫特羅在c18和離子交換固相萃取柱上的保留行為進行了研究，發現不同濃度鹽酸克倫特羅的固相萃取回收率在75%～95%之間。熊芳[s]等利用SPE凈化樣品，用HPLC測定了動物肝臟中四種磺胺類藥物的殘留量。采用 SPE前處理技術，建立了HPLC法快速測定雞肉、魚、蝦中呋喃它酮(furaItadon)、呋哺唑酮(furazolidonum)呋喃西林 (furacilin)、呋喃妥因(titrofurantonic)四種藥物殘留量，四種藥物在雞肉、魚、蝦樣品中的添加回收率為87%～102%。

　　3.基質固相分散技術

　　基質固相分散技術(Matrix Solid—Phase Dispersion，MSPD)是一種在SPE的基礎上改進后的樣品處理方法[14~22]。它是將樣品(固態或液態)直接與適量反相鍵合硅膠一起混合研磨，使樣品均勻分散于固定相顆粒的表面，制成半固態裝柱，然后采用類似于SPE的操作進行洗脫。與SPE相比，基質固相分散技術的優點在于：它依靠機械剪切力、c-s鍵合相的去垢效應和巨大的表面積使樣品結構破碎，并且在填料表面均勻分散，濃縮了傳統的樣品前處理中所需的樣品勻化、組織細胞裂解、提取、凈化等過程，避免了樣品勻化、轉溶、濃縮造成的待測物損失。張素霞‘¨’等以MSPD為基礎，選擇國內常用的9種磺胺類藥物建立了多殘留快速分析技術，并對MSPD樣品處理過程和HPLC分離方法進行了探討。Crescenzi["]等用MSPD技術提取凈化牛肝中的克倫特羅，并用LC—MS檢測。

　　4.超臨界流體萃取

　　超臨界流體萃取(Supercritical Fluid Extraction，SFE)技術是以超臨界狀態下的流體為溶劑，利用該狀態下的流體所具有的高滲透能力和高溶解能力分離混合物的過程。超臨界流體是溫度與壓力均在其臨界點之上的流體，性質介于氣體和液體之間，有與液體相接近的密度，與氣體相接近的黏度及高的擴散系數，故具有很高的溶解能力及良好的流動、傳遞、滲透性能。超臨界流體萃取與其他技術如溶劑萃取、蒸餾、常規柱色譜等相比具有速度快、效率高、選擇性強、易于凈化等特點。最常用的超臨界流體為 C02，它具有無毒、無臭、化學惰性、不污染樣品、易于提純等優點E23,24]。隨著十多年的發展，SFE已經在環境檢測、醫藥衛生、食品檢驗等領域得到了廣泛的應用。Jimenez采用離子對型SFE提取食品中的克倫特羅。當壓力為38.3MPa，溫度為80C時，萃取時間30min的回收率大于87%。