病原性真菌的檢測

　　一、實驗目的

　　了解真菌接種、培養的一般程序;掌握單細胞真菌和多細胞真菌的菌絲、孢子的形態特點;掌握真菌不染色標本直接檢查方法。

　　二、實驗內容

　　(一)真菌的菌落觀察

　　觀察真菌菌落的形態特點及顏色有助于病原性真菌的鑒定。一般觀察真菌的菌落必需將真菌培養于沙保弱氏培養基(俗稱大培養)，經數日致十數日的培養后才可看到典型菌落。

　　1. 材料

　　(1)臨床標本(可疑真菌感染)：毛發或皮屑。

　　(2)真菌菌種：新生隱球菌，白假絲酵母菌，絮狀表皮癬菌。

　　(3)沙保弱氏葡萄糖斜面培養基(含青、鏈霉素)。

　　(4)其它：70%酒精 、無菌生理鹽水 、平皿等。

　　2. 方法

　　(1)臨床標本用70%酒精浸泡數分鐘，殺死表面雜菌，以無菌生理鹽水洗滌。

　　(2)將處理過的臨床標本和實驗室保存菌種分別接種于2~3只含有青、鏈霉素的沙保弱氏葡萄糖斜面培養基上，對臨床標本直接將數根毛發或數塊皮屑接種。真菌菌種則用滅菌接種環按斜面培養基接種法接種。

　　(3)置22~28℃培養2~3w或37℃培養箱中培養3~7d。

　　(4)一周觀察1~2次，臨床標本連續培養3w無菌落生長者可報告陰性，如長出菌落，應逐日觀察菌落形態及顏色變化。

　　3. 結果觀察

　　真菌的菌落從形態上可分三大類：酵母菌落、酵母樣(型)菌落及絲狀菌落。

　　(1)酵母菌落(觀察新生隱球菌培養物)：菌落為圓形、較白色，邊緣整齊表面光滑、濕潤，假菌絲不伸入到培養基內，和表皮葡萄球菌菌落相似。

　　(2)酵母樣(型)菌落(觀察白假絲酵母菌)：表面和酵母菌落相似，但生成的假菌絲伸入培養基內。

　　(3)絲狀菌落：觀察各種皮膚絲狀菌斜面培養物,菌落表面大都有氣生菌絲,肉眼觀察呈絨毛狀、粉狀、棉花樣等，故稱絲狀菌落，色澤多種多樣，紅色毛菌呈紫紅色，鐵銹色毛菌呈鐵銹色或棕色等，菌落底層有營養菌絲伸入培養基內。