用高效液相色譜法檢測食品中亞硝胺殘留的含量

　　內容摘要：檢測步驟 ①樣品前處理：參照氣相色譜一熱能分析儀法。 ②衍生反應：取二氯甲烷濃縮提取液l mI。，于具塞小試管中，加溴水氫冰乙酸0.03 mL，混勻。置紅外燈加熱器上(50℃)加熱30 min，通高純N2，揮去二氯甲烷。滴1滴0.02%酚酞指示劑，依次加0.2 mLNR H20(1+1)、0.01 mol·L-1 Cu(NO2)2溶液0.10 mL，準確移入5%二硫化碳氯仿溶液0.05 mL，振搖1 min，靜置分層，棄水相。水洗有機相數次，至水相無色。加0.01mol·L-1 HgCl2 溶液0.10 mL，振搖有機相至棕色全褪去，取有機相5uL注入HPLC儀檢測。

　　高效液相色譜法

　　1.儀器

　　HPLC儀(具紫外檢測器)。

　　2.試劑

　　參照氣相色譜一質譜法。

　　3.儀器工作條件

　　①紫外檢測器波長273nm。

　　②色譜柱：uNucleosilCN5(2.6mm×250mm)。

　　③流動相：15%乙酸乙酯-85%正己烷(0.01ug·kg-1HgCl2飽和)。

　　④流速：0.8mL/min。

　　⑤柱溫：室溫。

　　⑥進樣體積：5uL。

　　4.檢測步驟

　　①樣品前處理：參照氣相色譜一熱能分析儀法。

　　②衍生反應：取二氯甲烷濃縮提取液lmI。，于具塞小試管中，加溴水氫冰乙酸0.03mL，混勻。置紅外燈加熱器上(50℃) 加熱30min，通高純N2，揮去二氯甲烷。滴1滴0.02%酚酞指示劑，依次加0.2mLNRH20(1+1)、0.01mol·L-1 Cu(NO2)2溶液0.10mL，準確移入5%二硫化碳氯仿溶液0.05mL，振搖1min，靜置分層，棄水相。水洗有機相數次，至水相無色。加 0.01mol·L-1 HgCl2 溶液0.10mL，振搖有機相至棕色全褪去，取有機相5uL注入HPLC儀檢測。

　　5.標準曲線制備

　　按上述衍生反應，分別取標準溶液5uL，注入HPLC儀，以峰面積為縱坐標、標準液的含量為橫坐標，繪制標準曲線。

　　6.計算

　　X = A1×V1×Cs×1000/(A2×V2×m)

　　式中：

　　X——食品中亞硝胺化合物含量，ug·kg-1;

　　A1、A2——樣品濃縮液與標準液中亞硝胺化合物的峰面積，mm2。;

　　V1——樣品濃縮液體積，mL;

　　V2——樣液進樣體積，mL;

　　Cs——標準溶液中亞硝胺化合物濃度，ug/mI;

　　m——樣品質量，g。