菊苣酸在人CYP450酶作用下的代謝研究

菊苣酸是從菊科植物菊苣干燥全草提取的一種水溶性酚酸類化合物，臨床前研究和藥理學研究表明菊苣酸具有增強免疫功能、抗炎作用，并能抑制透明質酸酶，保護膠原蛋白Ⅲ免受可導致降解的自由基的影響。同時還有研究表明菊苣酸具有抑制HIV-1和HIV-1整合酶的作用。細胞色素P450(CYP450)是藥物和其他內、外源物的主要代謝酶，可催化多種藥物、前毒物、前致癌物等外源性物質氧化和還原代謝和類固醇激素、花生四烯酸等內源性物質的合成和代謝。有研究者進行了菊苣酸對人CYP450酶的體外抑制作用研究。

體外運用肝CYP450酶技術進行藥物代謝動力學研究可以預知候選化合物在體內代謝物，通過對這些代謝物活性和毒性研究，尋找更為安全有效的化合物，大大減少新藥開發和研究費用。中藥成分復雜，其藥效學基礎大多數仍然需要經過CYP450酶代謝，并有可能進一步影響其他藥物代謝或者產生相互作用。深入研究中藥有效成分對藥物代謝酶系統影響規律有助于闡明中藥藥理學作用分子機理與藥物相互作用機理，為臨床合理安全地使用中藥提供理論基礎。在中國GLP機構排名中靠前的美迪西，其藥代動力學實驗室已經通過CFDA的GLP認證，實驗研究遵循ICH、CFDA和FDA的指導原則，可以根據客戶需求設計并開展體內、體外藥代動力學試驗，為客戶提供一整套藥代動力學評價和優化服務。

在新藥開發研究早期，采用P450酶技術進行體外藥物代謝動力學研究可以使我們了解藥物在實驗動物和人之間代謝方式、途徑及差異，為毒性研究提供重要信息。有研究者考察了菊苣酸(CRA)對人源CYP450酶的體外抑制作用，并研究CRA在Caco-2細胞中的轉運特征及CRA在大鼠原位腸血管灌流模型和大鼠體內的藥物代謝動力學。方法是

（1）在混合人肝微粒體孵育體系中，分別以非那西丁O-脫乙基化(CYP1A2)、安非他酮羥基化(CYP2B6)、阿莫地喹去乙基化(CYP2C8)、雙氯芬酸4’-羥基化(CYP2C9)、S-美芬妥英4’-羥基化(CYP2C19)、右美沙芬O-去甲基化(CYP2D6)、咪達唑侖1’-羥基化(CYP3A4/5)和睪酮6β-羥基化(CYP3A4/5)反應作為7種CYPP450酶亞型代謝活性的標志，并用陽性抑制劑對試驗體系進行驗證。建立LC-MS/MS法檢測各特征性反應的代謝物生成量，并計算CRA的IC50值，通過代謝轉化的變化來考察CRA對人肝微粒體中CYP450酶7種亞型的體外抑制作用。

(2)建立了Caco-2細胞中CRA的測定方法，以P-gp底物地高辛作為陽性對照，考察CRA在不同濃度(1μM、10μM和100μM)時其在Caco-2細胞單層上的跨膜雙向轉運情況。

(3)建立了大鼠原位腸血管灌流模型，通過十二指腸給藥研究腸對CRA的吸收。

(4)大鼠24只隨機分為四組，口服CRA低(25mg/kg)、中(50mg/kg)、高(100mg/kg)三個劑量組和一個靜脈注射組(2mg/kg)，采用建立的LC-MS/MS法測定血漿中CRA及其代謝物CAFA和CA的濃度，運用藥動學軟件DAS2.0計算出相應的藥動學參數。

論文作者通過研究發現：

(1)CRA對CYP450酶7種亞型(CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4/5(底物為咪達唑侖、睪酮))均沒有明顯的抑制作用。

(2)CRA在不同濃度(1μM、10μM和100μM)時，從腔面到基底面(AP→BL)的表觀滲透系數(Papp)值分別為(0.68±0.07)×10^-6cm/sec、(0.85±0.04)×10^-6cm/sec和(0.84±0.05)×10^-6cm/sec，從基底面到腔面(BL→AP)的Papp值分別為(0.70±0.09)×10^-6cm/sec、(0.83±0.10)×10^-6cm/sec和(0.85±0.09)×10^-6cm/sec，外排比率ER值均接近1。

(3)十二指腸給藥后，腸血管灌流模型中CRA在灌流液中的濃度隨時間的變化而增大，在90min時趨于穩定，腸吸收率為(12.6±0.57)%。

(4)大鼠口服CRA后在體內表現為二室模型，達峰時間晚，消除較慢。大鼠口服低、中、高劑量CRA后的藥動學參數:藥時曲線下面積(AUC(0-∞))分別為7886.8±208.9μg/L*h、35468.8±1737.4μg/L*h、45422.1±398.4μg/L*h；半衰期(T1/2z)分別為4.79±1.09h、5.15±0.9h、4.80±0.70h；清除率(CLz)分別為3.3±0.1L/h/kg、1.4±0.07L/h/kg、2.2±0.02L/h/kg；表觀分布容積(Vz)分別為22.5±4.9L/kg、10.4±1.4L/kg、15.2±2.3L/kg；最大血藥濃度(Cmax)分別為1097.7±84.4μg/L、3666.0±195.4μg/L和5597.0±325.0μg/L；達峰時間(Tmax)均為4.0h。大鼠尾靜脈注射2.0mg/kgCRA后的藥動學參數:AUC(0-∞)為51432.7±3650.2μg/L*h；T1/2z為4.5±0.4h；CLz為0.04±0.003L/h/kg；Vz為0.25±0.034L/kg。

研究結果發現CRA對人CYP450酶無抑制作用，表明其在臨床藥物配伍中不會對其他藥物造成潛在的有關肝藥酶抑制方面的藥物相互作用風險；CRA在大鼠體內的絕對生物利用度較低，在大鼠體內存在明顯的代謝，其腸細胞跨膜轉運通透性較差，跨膜方式可能主要為被動轉運。

隨著對P450酶系研究的不斷深入和對其功能、調控及表達的進一步認識，將有助于認識它在藥物代謝中的作用，進行菊苣酸對人CYP450酶的藥物代謝動力學作用研究，為闡明藥物代謝個體差異分子基礎，從而充分發揮藥物療效，減少或避免不良反應的發生，為指導臨床用藥個體化提供科學依據。