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  • 美迪西被譽為中國優秀的藥物研發外包服務公司(CRO)之一,在上海建立了一家集化合物合成、化合物活性篩選、結構生物學、藥效學評價、藥代學評價和毒理學評價為一體的符合國際標準的綜合技術服務平臺,并得到了國際藥品管理部門的認可。www.medicilon.com.cn?

    色譜-質譜聯用法在皂苷體內代謝產物分析中的研究

    上一篇 / 下一篇  2018-10-19 09:27:06

    皂苷是許多中草藥如人參、遠志、桔梗、甘草、知母和柴胡等的主要有效成分之一,藥理研究表明皂苷類成分具有抗菌、抗腫瘤、調節機體代謝及免疫、治療心血管疾病和糖尿病等的生物活性。采用色譜-質譜連用法進行皂苷體內代謝產物分析,為闡明中藥的治病機制提供有利的證據。

    液相色譜-質譜聯用(LC/MS)技術是一項集高效液相色譜HPLC的高分離性能與串聯質譜的高靈敏度、高專屬性優點于一身的生物分析技術,它不需要分析物之間實現完全的色譜分離,其多窗口檢測功能允許同時對多個成分進行定量分析。美迪西是一家臨床前CRO公司,提供新藥研發外包服務,其生物分析服務部門擁有專業的科研團隊,分析實驗室配置先進的儀器設備,實行全面的信息化管理,實驗研究符合FDA/CFDA GLP標準要求,服務內容涉及藥代動力學、藥效學、免疫原性和生物等效性等研究方面,為客戶提供小分子藥物、生物制劑、疫苗和生物標記物的篩選與開發,以及臨床前和臨床研究。

    中草藥及其方劑成分復雜,HPLCUVDAD檢測器相聯接,對于單個色譜峰僅能提供保留時間及紫外吸收等信號,而對未知成分所能提供的結構信息相當有限。色譜峰的指認必須有對照品,而大多數中藥化學成分的對照品很難獲得,而對于體內中藥藥物分析,一般的檢測技術也難以滿足給藥后血藥濃度的測定要求,,

    HPLC/MS的應用可以集HPLC的高分離效能與串聯質譜的高靈敏度、高專屬性的優點于一體,,并能夠給出被測組分的分子量信息,通過多級串聯質譜分析,還可以得出被測物質的結構信息。

    1、液相色譜串聯質譜法進行人血液中偽人參皂苷代謝產物分析

    建立液相色譜串聯質譜法測定人血漿中偽人參皂苷GQ濃度。在血漿樣品中加入適量內標,以乙酸乙酯萃取后采用Waters Xevo TQS LC-MS/MS進行分析。采用Poroshell 120 EC C8色譜柱(2.1 mm×50 mm,2.7μm),柱溫40℃,以甲醇-10 mmol·L-1醋酸銨水溶液(8020)為流動相,流速0.3 m L·min-1;采用多反應離子監測(MRM)的掃描模式,以電噴霧離子源(ESI)在負離子電離模式下進行測定。

    該方法的線性范圍為2.500~5 000 ng·m L-1,最低定量限為2.500 ng·m L-1,日內、日間精密度均小于15%,準確度在85%~115%之間,萃取回收率約9%~11%,基質效應約66%~73%,穩定性考察結果良好。藥動學試驗結果表明,靜注偽人參皂苷GQ 120 mg·次-1,每日1次,連續用藥5 d后,達峰時間為2 h,半衰期約10 h。試驗第1 d和第5 d主要藥代動力學參數基本一致,計算蓄積系數分別是RC max=0.964±0.099,和RAUC=0.965±0.181,兩者均接近1

    該方法適用于偽人參皂苷GQ的人體藥代動力學研究。在此給藥方案下,偽人參皂苷GQ在人體內沒有明顯蓄積現象,連續給藥不影響偽人參皂苷GQ的人體藥代動力學過程。

    2LC-MS/MS進行大鼠血液中丫蕊花皂苷代謝產物分析

    采用高效液相-串聯質譜(LC-MS/MS)法測定大鼠血漿中丫蕊花皂苷G的含量,并研究其在大鼠體內的藥動學特征。方法采用Phenomenex Luna C18色譜柱(150 mm×2 mm,3μm),流動相為乙腈-(0.1%甲酸),流速0.2 mL·min~(-1),以人參皂苷Rg3為內標;分別于大鼠尾靜脈注射丫蕊花皂苷G 0.250.51 mg·kg-1,給藥后于不同時間點采血,經固相萃取法處理后,采用上述LC-MS/MS法測定血藥濃度;采用DAS 3.0軟件、非房室模型擬合藥代參數。結果 0.01~1.0μg·m L-1丫蕊花皂苷G與峰面積的線性關系良好,方法學考察均符合要求;大鼠靜脈給藥后的血漿藥動學參數為:t1/2=3.447±0.898 hMRT0-=4.568±1.075 hCL=0.858±0.171 L·h-1·kgAUCCmax隨給藥劑量的增加而等比增大,符合線性藥動學特征。此方法簡便、靈敏,結果準確,適用于大鼠血漿中丫蕊花皂苷G的含量測定及其藥動學研究。

    也有研究者采用HPLC-ESI-MS/MS方法對血塞通注射液中皂苷進行定性定量分析。還有研究者采用加壓溶液萃取法(PLE)與HPLC-DAD-MS技術測定人參葉和人參中9種皂苷及2種聚乙炔醇類化合物(人參環氧炔醇,人參醇),這是一種快速檢測中藥的方法,對于控制人參的質量很有幫助。

    建立可靠的分析方法是進行藥物體內代謝產物分析的前體,隨著現代色譜聯用技術的發展,體內多微量代謝產物的分離、鑒定已經成為了一個連續過程。尤其是LC-MS樣品前處理簡單,一般不要求水解或衍生化處理,運用LC-MS技術不僅可以避免復雜繁瑣的分離、純化代謝產物的工作,而且可以分離鑒定難以辨識的體內痕量代謝產物。

     


    TAG: 中草藥皂苷

     

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