聚丙烯酰胺凝膠管制備與檢測
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下一篇 2012-07-01 17:54:06
內容摘要:用微量注射器取待檢液50L,注入凝膠管上,成疊加層,每支玻管通入3 mA電流電泳,直至亞甲藍的+藍色譜帶達到距凝膠管下端7
mm處,停止電泳,從玻管中撥出凝膠于染色液中過夜,用7%醋酸脫去電泳譜帶以外的顏色。按照肉、大豆、小麥圓盤電泳譜帶比較即可判定。
取尿素13.4 g,加TEME[)緩沖液(pH3.5)3.5 mI。丙烯酰胺液7 mL、水4.5
mI,充分混合溶解,如有氣泡經減壓脫氣后,加聚合促進劑1.4 mL,使總量為28 mL,立即用注射器移入長100 InIn、內徑5
mm玻管中,玻管上端空出約10 mm,靜置凝膠化,加水封存。
檢測稱取樣品(10 g)于乳缽中、充分磨碎。準確稱取磨碎樣品O.100 g于離心管中,加10 mol尿素2%巰基乙醇液lO mL,混勻,24
h后,離心,上清液待檢。將聚丙烯酰胺凝膠管,去除封存水裝進緩沖液槽中,下部電極接在陰極上,上部電極接在陽極上,在上、下槽中注入稀釋10倍電泳緩沖液(pH4.O),上部緩沖液加指示劑2滴,攪拌。
用微量注射器取待檢液50L,注入凝膠管上,成疊加層,每支玻管通入3 mA電流電泳,直至亞甲藍的+藍色譜帶達到距凝膠管下端7
mm處,停止電泳,從玻管中撥出凝膠于染色液中過夜,用7%醋酸脫去電泳譜帶以外的顏色。按照肉、大豆、小麥圓盤電泳譜帶比較即可判定。
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