蛋白質的測定----常量凱氏定氮法與自動定氮分析法

　　內容摘要：待凱氏燒瓶內液體減少至約1/3時，將冷凝管下端提出液面，再蒸餾數分鐘，用少量水沖洗冷凝管下端后停止蒸餾。取下接收瓶，用鹽酸標準溶液滴定至終點。同時做空白試驗(除不加樣品外，取與處理樣品相同量的硫酸銅、硫酸鉀、硫酸，按同一方法做)。

　　常量凱氏定氮法

　　本法適用于各類食品中蛋白質的測定。

　　1.原理

　　同微量凱氏定氮法。

　　2.儀器

　　3.試劑

　　①CuSO~。

　　②K2S04。

　　③濃HzS04。

　　④飽和硼酸溶液。

　　⑤混合指示劑：1份0.1%甲基紅乙醇溶液與5份0.1%溴甲酚綠乙醇溶液臨用時混合。也可用2份0.1 9/6甲基紅乙醇溶液與1份0。1%次甲基藍乙醇溶液I臨用時}昆合。

　　⑥50%氫氧化鈉溶液。④0-1 tool‘L叫HCl標準溶液(需用無水碳酸鈉標定后使用)。

　　4·操作步驟

　　準確稱取1～3 g樣品，小心地放人750 mL凱氏燒瓶中，加入10 g無水硫酸鉀，0.5 g硫酸銅和25 mL濃硫酸，于凱氏瓶口放一小漏斗，并將其以45。角斜支于有小孔的石棉網上。在通風柜中用電爐以小火加熱，待內容物全部炭化，泡沫停止產生后，加大火力，保持瓶內液體微沸，至液體變藍綠色透明后再繼續加熱微沸30 min，冷卻。冷卻后連接好蒸餾裝置，將冷凝管下端插入接受瓶的液面之下(瓶內預先加入60 mL飽和硼酸溶液及2～3滴混合指示劑)。在凱氏燒瓶中加入50~100 mL蒸餾水，玻璃珠數粒，通過安全漏斗加入60～80 mL 50%氫氧化鈉溶液，至溶液呈藍黑任.為將蒸餾吸收裝置連接好，加熱蒸餾。待凱氏燒瓶內液體減少至約1/3時，將冷凝管下端提出液面，再蒸餾數分鐘，用少量水沖洗冷凝管下端后停止蒸餾。取下接收瓶，用鹽酸標準溶液滴定至終點。同時做空白試驗(除不加樣品外，取與處理樣品相同量的硫酸銅、硫酸鉀、硫酸，按同一方法做)。

　　5.計算

　　自動定氮分析法

　　1.原理

　　同微量凱氏定氮法。

　　2.儀器

　　①自動凱氏定氮儀：該裝置內有自動加堿蒸餾裝置，自動吸收和滴定裝置及自動數字顯示裝置。

　　②消化裝置：含有凱氏消化瓶和紅外線加熱裝置。

　　3.試劑

　　本實驗所用試劑皆為分析純，所用水皆為蒸餾水。

　　①濃硫酸。

　　②凱氏片(催化劑)KzS04+Se。

　　③40%氫氧化鈉溶液。

　　④無水硫酸鈉。

　　⑤1 9/5硼酸(H。BO。)吸收液：稱取100 g硼酸溶于10L水中。加入100 mI.溴鉀酚綠溶濃，再加人70 ml。甲基紅溶液，最后加入3 mL 4 9/6氫氧化鈉溶液。

　　⑥O.1 mol·I。叫鹽酸標準溶液，標定后使用。

　　4.操作步驟

　　①樣品消化：稱取一定量(O.5～1.0 g)的樣品于消化管中(半固體樣品用稱量紙稱取)，加一粒凱氏片于消化管中，然后加入5 mL，濃硫酸，放置過夜，同時做樣品空白管。在消化過程中，先低溫消化(防止高溫消化時樣品溢出)，低溫消化1 h后，將溫度升到最高擋，至消化液無色透明。待消化液冷卻后，加入少量水沖洗消化管內壁，振搖，以免內壁黏有樣品以致消化不完全。然后于消化爐上再消化，直至液體無色透明。放置室溫后，加水至25 mI。，待測。

　　②樣品定氮：開啟自動凱氏定氮儀電源，輸入測定時的參數，打開相應按鈕，產生蒸汽5 min，將消化管裝入，關閉安全門，開始自動定氮。當結束燈亮時，記錄滴定結果。打開安全門，進行下一個樣品測定。

　　5.計算

　　6.注意事項

　　①使用自動定氮儀時，定氮前，應將管路中的吸收液排出去。

　　②本儀器消耗鹽酸標準溶液的用量最佳范圍在O.5～7 mI。。