多功能柱凈化高效液相色譜法測定步驟

　　內容摘要：多功能柱凈化吸取約55mI.濾液加入多功能柱的試管中，將MFc柱套管套入試管內。緩慢將套管推至試管底部，使提取液通過MFc柱進入套管中。從套管內準確移取1.0mL凈化液至5mL棕色小瓶中。于50℃下吹干。加入流動相定容至O.5mL，過0.45弘m濾膜供HPLC分析用。

　　稱量天平、高速均質器、高效液相色譜儀(配熒光檢測器)、柱后衍生化裝置、真菌毒 ‘素蒸發器、均質器、色譜柱(C18柱，柱長150mm，內徑4.6mm，填料直徑5弘m)。

　　測定步驟

　　(1)提取稱取試樣約25g(精確至0.1g)于500mL具塞錐形瓶中，加入100mL乙腈～水(84+16，體積)提取液，以均質器高速攪拌提取3min，過濾。

　　(2)多功能柱凈化吸取約55mI.濾液加入多功能柱的試管中，將MFc柱套管套入試管內。緩慢將套管推至試管底部，使提取液通過MFc柱進入套管中。從套管內準確移取1.0mL凈化液至5mL棕色小瓶中。于50℃下吹干。加入流動相定容至O.5mL，過0.45弘m濾膜供HPLC分析用。

　　(3)測定

　　①色譜條件色譜柱：15cm×4.6ITim(內徑)，5pm，I。icroCART C18柱。流動相：甲醇一乙腈一水(215+215+570，體積)，每升中加入120mg溴化鉀及200/~L硝酸，流速1.0mI。/min。檢測條件：激發波長365nm，發射波長440nm。進樣量：100弘L(樣液)。

　　②色譜測定以程序進樣方式，移取適量的標準儲備溶液，以流動相稀釋成5個不同濃度的標準工作液。以化學工作站建立標準工作中黃曲霉毒素B1、黃曲霉毒素B2、黃曲霉毒素Gl、黃曲霉毒素G2的響應值與相當于樣品中黃曲霉毒素含量的線性方程，并對樣液的色譜數據進行處理。在上述色譜條件下，黃曲霉毒素Bl、黃曲霉毒素B2、黃曲霉毒素G。、黃曲霉毒素G2衍生物的保留時問約為3.5min、4.2min、4.7min、5.7min。