感受態細胞的制備方法及詳細步驟

　　感受態細胞是做連接轉化必用的，現在對其制備方法做一下詳細的說明，供大家參考：

　　1、首先將保存的細菌或酵母等，需要做感受態的細胞從-20℃取出，取20ul菌液，加入到2ml的LB培養基中，37℃搖菌過夜，將其復蘇。

　　2、從復蘇的細菌或酵母菌中取20ul菌液加入到2ml的LB培養基中，37℃，260rpm搖菌3h。

　　3、冰上放置10min

　　4、4℃5000rpm離心5min，棄掉LB培養液，倒置在消毒的濾紙上1min，空干水

　　5、加入200ul(十分之一體積)預冷的0.1mol/L的氯化鈣重懸

　　6、冰浴放置10min

　　7、4℃5000rpm離心5min，棄掉LB培養液，倒置在消毒的濾紙上1min，空干水

　　8、加入100ul(二十分之一體積)預冷的0.1mol/L的氯化鈣溶液重懸

　　9、4℃放置在冰箱中，12-24h之內轉化，注意一定不要少于12h或者多于24h，大約在16h效果最佳。

　　中國生命科學論壇為您提供最專業的技術支持，和實驗方法