雙黃連注射劑是近年來研制的中藥制劑，在臨床上主要用于急性上呼吸道感染、急性支氣管炎、急性扁桃腺炎、肺炎及急性尿路感染等，其療效確切，安全，應用十分廣泛。雙黃連注射劑由金銀花、黃芩、連翹3味中藥提取制成，主要成分為黃芩苷、綠原酸、連翹苷等[1]。藥理學研究已證實黃芩苷具有抑菌、清熱、降壓、鎮靜、利尿、利膽、抗炎、抗變態反應、解毒等作用;綠原酸具抗菌消炎、清熱解毒等作用;而連翹苷則具有較強的抑菌、抗病毒的活性。
雙黃連注射劑黃芩苷含量測定的方法主要有高效液相色譜法、薄層掃描法、紫外分光光度法等，高效液相色譜法具有分離效能高、分析速度快且精準等特點，適合中藥成分的多樣性及復雜性，在雙黃連制劑的質量控制上應用也最多。本文通過優化色譜條件測定黃芩苷的含量，以期為進一步研究雙黃連注射劑中綠原酸及其它成分打下基礎，為雙黃連注射劑工藝研究和質量控制提供理論基礎。
1儀器與試劑
1.1儀器Agilent1100高效液相色譜儀(美國Agilent公司);TU-1800紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責公司);KQ-100型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);電子天平(上海精科天平);予華SHZ-D(Ⅲ)循環水式真空泵(河南省鞏義市英峪予華儀器廠);Diamonsil(鉆石)C18色譜柱
(5μm，4.6mm×150mmCat.no：9990Ser.no：8011571DikmaTechnologies)。
1.2試劑雙黃連注射液(批號Z23021166黑龍江烏蘇里江佳大制藥有限公司);黃芩苷化學標準品(批號110715-200514,中國藥品生物制品檢定所);色譜甲醇(天津大茂化學試劑廠);分析純甲醇(天津市北方天醫化學試劑廠);磷酸(河北省保定化學試劑廠)。
2方法與結果
2.1色譜條件Diamonsil(鉆石)C18色譜柱(5μm，4.6mm×150mm),流動相為A-甲醇(色譜純)：B-蒸餾水(50∶50)，流速為1.0ml/min，檢測波長為326nm，進樣量20μl。其分離色譜見圖1～2。
2.2溶液的制備
2.2.1標準品溶液的配制精密稱取黃芩苷標準品0.005100g至50ml容量瓶中，用甲醇(分析純)定容至刻度，超聲至其完全溶解。配制成濃度為0.102mg/ml的儲備液放入冰箱，低溫儲存。
2.2.2供試品溶液的配制用0.1ml的移液管從雙黃連注射液中精密吸取0.05ml至10ml容量瓶中，用甲醇(分析純)定容至刻度，超聲10min使溶解。再用0.45μm的濾膜過濾至用鉻酸洗液浸泡3h并干燥好的10ml比色管中，扭緊塞子。
2.3線性關系考察精密量取濃度為0.102mg/ml黃芩苷標準品儲備液0.5，1，2，4，6，8ml分別至10ml容量瓶中，用甲醇(分析純)定容至刻度，配制成濃度為5.1，10.2，20.4，40.8，61.2，81.6μg/ml的一系列標準溶液后，再用0.45μm的濾膜過濾至用鉻酸洗液浸泡3h后干燥好的6支10ml比色管中，扭緊塞子。按上述色譜條件進行測定，每個濃度的黃芩苷標準液測3次。根據3次峰面積的平均值，求黃芩苷的標準曲線。結果見表1，黃芩苷在5.1～81.6μg/ml濃度范圍內呈良好線性關系。回歸方程為Y=41.409X-
132.35，r=0.9998。
2.4加樣回收率測定用1.0ml的移液管從雙黃連注射液中精密吸取1ml至100ml容量瓶中，用甲醇(分析純)定容，并超聲10min使其完全溶解。從中吸取5ml至10ml容量瓶中，共5份，各精密加入黃芩苷標準品儲備液
0.051，0.102，0.204，0.306，0.357，0.510mg，用甲醇(分析純)定容至刻度，并超聲10min使其完全溶解，按上述色譜條件進行測定，根據峰面積，計算黃芩苷含量，并計算黃芩苷的平均加樣回收率。結果見表2。表1黃芩苷的線性關系考察實驗數據表2黃芩苷的加樣回收率實驗結果
2.5精密度實驗取雙黃連注射液1支，根據供試品溶液的配制法配制樣品溶液1份，按上述色譜條件進行測定，共進樣5次。結果見表3。表3黃芩苷的精密度實驗結果
2.6重現性實驗取同一批號雙黃連注射液5支，根據供試品溶液的配制法配制樣品溶液5份，按上述色譜條件進行測定。結果見表4。表4黃芩苷的重現性實驗結果
2.7穩定性實驗根據供試品溶液的配制法配制樣品溶液一份，在室溫下放置，分別于0，3，6，9，12h時按上述色譜條件測定一次峰面積，實驗結果RSD=1.22%，表明黃芩苷在12h內穩定，結果見表5。表5黃芩苷的穩定性實驗結果
2.8樣品含量測定根據供試品溶液的配制法配制樣品溶液，按上述色譜條件進行測定。經實驗測得雙黃連注射液中黃芩苷的含量為7.1mg/ml。結果見圖1～2。
3討論
雙黃連注射劑的不良反應源自中成藥的復雜成分，如金銀花中所含有的綠原酸和異綠原酸，不僅具有抗菌抗病毒作用，又具有致敏原作用，可引起變態反應，是引起過敏反應的主要原因之一。童路[2]報道雙黃連針劑引起的過敏反應與黃芩苷有關，毒性反應與黃芩中的另一種成分有關。
黃芩苷與綠原酸的極性相差極大，在質量標準中也只規定兩者含量分別測定，用HPLC法同時測定兩者含量，多采用梯度洗脫法逐漸降低流動相極性的方法,而吸收波長一般選擇326nm，以提高綠原酸的靈敏度。黃芩苷的HPLC測定，其流動相有甲醇∶水∶冰醋酸(5∶50∶1);甲醇∶水∶磷酸
(50∶50∶0.2);異丙醇∶甲醇∶3%的醋酸(5∶30∶65);甲醇∶0.5%三乙胺(75∶25)系統。而在2005年版《中國藥典》中黃芩苷的色譜條件與系統適用性試驗為：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇∶水∶冰醋酸(50∶50∶1)為流動相，檢測波長為274nm，理論塔板數按黃芩苷峰計算應不低于1500。但我們在實驗條件摸索過程中發現，流動相采用甲醇∶水(用10%磷酸調節pH至2.7)，比例定為50∶50，黃芩苷與注射液中其它組分分離良好，并且能減少磷酸鹽對泵的侵蝕等。
雙黃連注射劑中主要成分分析方法報道很多[3～5]，但制劑中其它成分分析方法少見報道，本文旨在通過黃芩苷的分析測定，進一步找出其中各種成分的分析、分離方法，探討雙黃連注射劑不良反應的原因。
