骨髓間充質干細胞基因工程改造方法的比較

摘要 目的: 對脂質體介導、反轉錄病毒載體介導、腺相關病毒載體介導這3 種常用的基因轉染方法進行比較, 尋找一種適合于骨髓間充質干細胞的基因轉移方法。方法: 實驗于2004- 10/2005- 06 在首都醫科大學北京神經科學研究所完成。①在脂質體介導下, 將增強的綠色熒光蛋白基因導入骨髓間充質干細胞, 然后通過G418 抗性篩選, 觀察轉染效率。② 反轉錄病毒介導的基因轉染, 首先利用LipofectAMINETM 2000 轉染包裝細胞系PT67, 獲得重組反轉錄病毒上清, 然后用病毒上清直接感染骨髓間充質干細胞。轉染后的細胞同樣用G418 篩選, 得到陽性克隆后進行定點消化、擴增。③在腺相關病毒介導的基因轉染過程中, 首先通過磷酸鈣沉淀法轉染包裝細胞系HEK293, 得到重組AAV-LacZ 病毒顆粒直接感染骨髓間充質干細胞, 1 周后進行β-gal 染色, 計算轉染效率。