分泌人腫瘤壞死因子α的基因工程細胞系的建立

【摘要】目的:建立穩定的基因工程細胞系。方法: 將含有人腫瘤壞死因子α( hTNFα)全長cDNA插入表達載體pSNAV2. 0,產生重組質粒pSNAV2. 0 - TNFα,利用陽離子脂質體介導將其轉染到人HEK - 293細胞中,G418篩選陽性克隆hTNF /293,采用Western blot檢測轉染細胞上清中hTNF蛋白的表達。結果: 通過SalⅠ和EcoRⅠ雙酶切、PCR 及測序鑒定證明:在質粒pSNAV2. 0中插入片段正確。采用RT - PCR和Western blot法檢測表明HEK - 293細胞培養上清中有hTNFα蛋白表達,分子量為17KDa。結論: 成功構建重組質粒pSNAV2. 0 - TNFα,真核表達載體構建正確,轉染HEK - 293細胞后可有效分泌hTNFα蛋白,并能分泌到細胞外。