焦測序法檢測禽流感病毒

《分析化學》2008年06期 

焦測序法檢測禽流感病毒 
汪維鵬;武海萍;周國華
  　　以焦測序技術為檢測平臺,在研究禽流感病毒基因特性的基礎上,建立一種檢測禽流感病毒及確定其是否為高致病性禽流感病毒的序列測定法。首先,選擇一段保守的M基因序列及一段包含裂解位點的HA基因序列為研究對象,采用聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction,PCR)擴增技術初步判斷其是否為禽流感病毒及病毒亞型;然后采用焦測序法檢測目的片段序列;最后,對焦測序法檢測序列進行分析,從基因序列上判斷其是否為禽流感病毒,并進一步判斷病毒的亞型以及是否為高致病性禽流感病毒。研究結果表明,當焦測序反應中三磷酸酰苷雙磷酸酶(Apyrase)的濃度為1.6U/mL時,能有效抑制錯誤信號的產生;當Klenow的濃度為90U/mL時,可讀序列長度為33個堿基。采用優化的焦測序反應體系測定了4個樣本,其中1個樣本被判斷為H5N1亞型禽流感病毒,具有潛在的高致病性;另外3個樣本為H9N2型禽流感病毒,具有低致病性。本方法具有準確、快速和實時檢測等優點。
【作者單位】：華東醫學生物技術研究所;華東醫學生物技術研究所;華東醫學生物技術研究所 南京210002蘇州大學藥學院藥物分析教研室;蘇州215123;南京210002;南京210002南京大學醫學院;南京210093
【關鍵詞】：禽流感病毒;亞型;致病性;焦測序法
【基金】：國家自然科學基金(No.30470454);日本日立中央研究所資助項目
【分類號】：R450
【DOI】：CNKI:SUN:FXHX.0.2008-06-018
【正文快照】：
　　1引言禽流感是由正黏病毒科A型流感病毒引起的禽類急性傳染病,被世界動物衛生組織(OIE)和我國《家畜家禽防疫條例》列為A類烈性傳染病。由高致病性禽流感病毒H5亞型引發的禽流感的爆發和流行,給我國及其它國家的養禽業造成了巨大的經濟損失;嚴重的威脅人類健康。因而,建立一種