紫外-可見分光光度法應用

*酸堿指示劑離解常數的測定

分光光度法可以測定酸堿離解常數，若為一元弱酸，在溶液中的離解反應為：

HB ? H+ + B-

若測出 [B-] 和 [HB]，就可算出 Ka。測定時，配制出三份不同 pH 的 HB 溶液，一份為強堿性溶液，另一份為強酸性溶液，分別在 B- 和 HB 的吸收峰波長處測定吸光度，由此計算出 B- 和 HB 的摩爾吸光系數。第三份為已知 pH 值的緩沖液，其 pH 值在 pKa 附近，在測得 B- 和 HB 的總吸光度后用雙組分測定的方法算出 B- 和 HB 的濃度，即可計算出弱酸的離解常數。

由 pH = pKa

可知，當 [B-] 和 [HB] 相等時： pKa = pH

若以 pH 為橫坐標，以某波長處測得的不同 pH 時的 A 為縱坐標作圖，得一條 S 形曲線，該曲線的中點所對應的 pH 即為 pK 值。