2D PAGE：雙向凝膠電泳

雙向凝膠電泳是將不同種類的蛋白質按照等電點和分子量差異進行高分辨率分離的分析方法。成功的二維電泳可以將2000到3000種蛋白質進行分離，是目前唯一的同時能分離成百上千種蛋白質的工具。通過對蛋白質雙向電泳的圖譜掃描，用相關軟件（PDQUEST等）進行圖譜差異分析，找到差別點。然后把差別點切出，進行脫色、酶解。最后樣品進入質譜測試，得到質譜原始數據文件。通過搜庫可得到差別點蛋白質的詳細信息。

 

原理：

1、根據蛋白質的等電點（第一向）和分子量（第二向）的不同進行分離。

2、電泳后根據蛋白質的上樣量對膠進行考馬斯亮蘭染色、銀染或熒光染色，然后用相關軟件對電泳圖象進行分析。

 

 

1、建議使用的蛋白質溶解體系為8M 尿素/4%CHAPS /40mMTris（Base）/65mM DTT；

2、樣品濃度大于2 ug/ ul；

由于蛋白質組學涉及的樣品范圍很廣，對于具體樣品的要求請和項目經理聯系。

 

IEF: IPG-PhorII (GE) and Protean IEF (BioRad)

Bio-Rad Model 111Mini IEF Cell

GE Ruby SE600 (16x16cm)

GE Ettan DALTsix (26x20cm)

BioRad Criterion pre-cast (13x9cm)

BioRad Protean (8.6x7cm)

Image master 2D Elite^?