最新改版：HPLC的日常維護及常見故障排除

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　　HPLC的基本結構

　　HPLC通常由儲液器、(在線脫氣裝置)、高壓輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器、數據處理系統等基本結構組成。

　　下面按儀器流路順序依次介紹各部分的日常清洗及維護心得：

　　一，日常維護

　　1、儲液器

　　? 流動相

　　① 過濾：微孔濾膜的選擇：普通液相——0.45 mm、UPLC MS——0.22mm

　　② 脫氣：脫氣方式——過濾HPLC&MS;脫氣，超聲&在線

　　③ 儲存方法：現配現用、4℃保存一周

　　2、泵的維護

　　? 流速的升起與降低：漸續升漸續降

　　? 流動相是否充足：抽入空氣干磨損傷泵

　　? 梯度洗脫在線脫氣保持開啟

　　3、六通閥的使用及清洗

　　? 推薦清洗方法：

　　在load與inject之間切換清洗

　　? 推薦使用方法

　　① 完全填充環：進樣量為定量環體積的2~5倍

　　② 部分填充環：進樣量不大于定量環體積的1/2

　　(注：閥切換速度過慢會對泵造成損傷，并影響進樣量的準確度)

　　4、色譜柱的維護及清洗

　　? 柱接口的維護：不宜擰過緊

　　? 預柱的清洗

　　? 反相鍵合相色譜柱的清洗順序：由樣品和流動相組成決定(若流動相含鹽或酸堿，須先用95%水，后用95%甲醇，各20倍柱體積)

　　5、檢測器的維護

　　? 氘燈(壽命2000h左右)

　　① 不宜頻繁開關

　　② 不使用時最好關閉

　　③ 沖柱時可以不接檢測器

　　二，常見故障排查

　　1、泵前流路氣泡

　　? 原因：

　　① 濾頭堵

　　② 流動相脫氣不徹底

　　? 解決方法：

　　① 拆下濾頭用純水和甲醇各超聲10min

　　② 將流動相搖勻后超聲10min(1000ml)

　　③ 打開旁路purge

　　2、物質保留時間重現性差

　　? 原因：

　　① 流動相比例不一致

　　② 梯度洗脫平衡時間不足

　　③ 泵穩定性不好

　　? 解決方法：

　　① 由同一人配制并使用同一套量器

　　② 延長平衡時間

　　③ 單向閥污染，清洗單向閥(不建議)

　　3、柱壓不正常升高

　　? 原因：

　　① 管路堵

　　② 色譜柱堵

　　? 排查步驟：按流路順序方向依次排查

　　? 分析原因：流動相中鹽析出或是其他原因

　　? 解決方法：

　　① 用適當溶劑沖洗或超聲清洗管路

　　② 用適當溶劑沖洗色譜柱

　　4、出不規則鋸齒狀峰，噪音異常變大

　　? 原因：

　　① 靜電干擾

　　② 檢測池污染

　　③ 檢測池有氣泡

　　④ 燈能量不足

　　? 解決方法：

　　① 接地

　　② 用適當溶劑低流速沖洗

　　③ 排氣(注意)

　　5、基線漂移

　　? 原因：

　　① 等度-柱平衡不足

　　② 梯度-某一相有紫外吸收、檢測波長接近末端吸收

　　? 解決方法：

　　① 多平衡一段時間

　　② 向兩相中加入等比例的鹽或酸，盡量避免使用末端吸收

　　6、靠近死時間處經常出現負峰

　　? 原因：

　　① 樣品溶劑吸光度低于流動相

　　② 洗脫出的物質在該波長無吸收

　　? 解決方法：

　　① 用流動相溶解樣品

　　② 若不對測定造成干擾可以不予處理

　　7、液相峰分叉或肩峰

　　? 原因：(首先要確認是否兩個物質未分開)

　　柱效降低，分離能力降低

　　? 解決方法：

　　① 沖洗柱子，用有機溶劑進行柱再生

　　② 倒用

　　③ 廢棄換新柱

　　8、峰展寬

　　? 原因：

　　① 流動相選擇不合適(比例、種類)

　　② 柱效下降

　　? 解決方法：

　　① 查化合物理化性質，調節pH抑制解離

　　② 更換溶劑類型

　　③ 更換色譜柱