分析測試百科網 > 行業資訊 > 微信文章

正相？反相？手性分離模式如何選擇？

月旭科技

2023.9.06

（圖片來源：包圖網）

哈嘍，小伙伴們，還記得上個世紀五、六十年代震驚世界的“反應停事件”嗎？反應停學名為沙利度胺Thalidomide，結構見下圖，其消旋體曾被用作緩解妊娠反應的藥物。但是后來才發現其中的R-型異構體才是有效的抗嘔吐成分，可減輕妊娠惡心、嘔吐等癥狀；而S-型異構體則會導致嬰兒畸形，結果當時在西德、荷蘭和日本等地區產生了大批的畸形兒。

隨著生物工程和生命科學的發展，科學家已經認識到，手性化合物例如手性藥物異構體盡管其物理和化學性質幾乎完全相同，只有旋光性不同，但它們在生物體內的生理活性和藥理作用卻存在很大的差別。為此，制藥行業中，必須對有效成分的對映體進行拆分，而不能將其混合物作為藥物出售。?

采用液相色譜法分離手性化合物，是目前首選方法之一，要考慮手性柱的固定相類型、分離模式及流動相溶劑。現在市面上手性固定相類型較多，手性色譜有正相分離和反相分離兩種模式，流動相溶劑的選擇與固定相、樣品性質、分離模式有關。今天，小編就和大家聊聊，如何選擇合適的手性分離模式。

正相分離模式

當樣品溶于非極性溶劑中，選擇正相分離模式。常用的流動相組合是烷烴類和醇類。其中，醇類起到了洗脫作用，烷烴類用來調節流動相的洗脫強度。

烷烴類試劑，可選擇正己烷、正戊烷、異己烷、正庚烷，它們對樣品分離沒有太大影響，不會改變選擇性和分離度，選擇正己烷較多。

流動相中的醇類，對目標物的分離起關鍵作用，不同的醇有不同的選擇性，且隨著流動相中醇類的比例提高，目標峰的保留時間縮短。最常用的醇類是乙醇和異丙醇，它們的洗脫能力是：乙醇>異丙醇。甲醇在烷烴中的溶解性不好，正己烷中甲醇的最大含量是5%。如果要在烷烴中加入甲醇，最好同時加入一定量的乙醇，提高流動相的溶解性。

在手性色譜中，為改善目標物的峰形，需要在流動相中添加酸或者堿。如果目標物是酸性化合物，往往要在流動相中加入酸性添加劑，如三氟乙酸、乙酸、甲酸等。如果目標物是堿性化合物，要在流動相中加入堿性添加劑，如二乙胺、三乙胺、丁胺、乙醇胺等。酸性或堿性添加劑的加入量一般為0.1%~0.3%，最大不超過0.5%，要注意色譜柱的pH耐受范圍。

需要注意的是：

1、正相色譜柱安裝前，必須先用合適的流動相沖洗整個儀器管路，包括進樣器。有些試劑（如丙酮、氯仿、二甲基甲酰胺（DMF）、二甲基亞砜、乙酸乙酯、二氯甲烷、THF）會破壞手性固定相的結構，請不要使用這些溶劑作為流動相的組成部分，或者作為樣品稀釋劑。如果有無法確定的，請咨詢廠家。

2、色譜柱能使用純甲醇或者純乙腈作為流動相，如果要將正己烷換成甲醇或者乙腈，或者換成其他極性溶劑，需要用純異丙醇作為溶劑充分過渡。

3、正相手性柱應避開含水的流動相。

“

應用案例

溴甲基苯異丙酸消旋體的測定

液相條件

色譜柱：Ultimate^? Cellu-J（4.6×250mm，5μm)? 。?

流動相：正己烷：乙醇：三氟乙酸（90：10：0.1）；

檢測波長：220nm；

柱溫：25℃；

流速：1mL/min；

進樣量：10μL；

樣品配置：1mg/mL，乙醇/正己烷（1/1）溶解。

反相分離模式

如果樣品溶于含水極性溶劑時，選擇反相分離模式。常用的流動相組合是有機相和水相。其中，水相用來調節流動相的洗脫強度，常用的水相可以是磷酸鹽緩沖液，或者是純水。有機相起到了洗脫作用，常用的有機相是乙腈、甲醇、乙醇、異丙醇等，且有機相比例越高，目標物的保留時間越短。

“

應用案例

鹽酸達泊西汀的測定

液相條件

色譜柱：Ultimate^? Cellu-JR（4.6×250mm，5μm)? 。?

流動相：甲醇：乙醇：二乙胺（95：5：0.1）；

檢測波長：220nm；

柱溫：20℃；

流速：0.6mL/min；

進樣量：5μL；

樣品配置：1mg/mL，甲醇溶解。

目前，月旭科技的手性固定相填料包括 Cellu-D、Cellu-J、Amy-D等，可以滿足絕大多數手性樣品分離需求。各位小伙伴有手性樣品分離或需要篩選柱子，歡迎聯系月旭售前技術熱線或當地銷售。

月旭科技手性色譜柱訂貨信息

規格	Cellu-D （正相）	Amy-D （正相）	Cellu-J （正相）	Cellu-DR （反相）	Cellu-JR （反相）
5μm， 4.6*150mm	00219- 31041	00221- 31041	00218- 31041	00262- 31041	00261- 31041
5μm， 4.6*250mm	00219- 31043	00221- 31043	00218- 31043	00262- 31043	00261- 31043