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重磅！無菌檢測詳細教程來了，文末有福利！
無菌的醫藥產品，不僅包括直接注射到人體的藥物比如疫苗，也包括原輔料、眼藥水、無菌醫療器械等。常見的無菌產品劑型為：液體或粉末、藥膏或油狀，固體形態，懸浮液和乳液等，這些產品在最終放行前都必須要測試微生物污染的狀況。
無菌檢驗原理是基于“薄膜過濾”的方法，它可以把微生物從各種樣品中富集，同時經過沖洗去除、中和抑制物質，灌入TSB、FTM培養基，經過 14 天的培養，并觀察樣本在不同培養基內濁度：無渾濁意味著通過無菌檢查！
那么，為了避免出現假陰性或者假陽性的情況，你需要關注實驗流程中的每一個細節，包括操作風險、取樣數量風險、A級環境維持和監測風險、SOP方法驗證、培養基的適用性檢查、儀器設備的自身風險、實驗用耗材的風險控制、結果判定的風險等。那么，
A. 哪些因素可能導致假陽性或者假陰性？
B. 怎樣證明實驗操作區域無菌？A級區浮游菌如何監測風險最低？
C. 選擇無菌濾筒（集菌培養器）應該關注哪些方面？如何驗收？
D. 陽性對照的目的是什么？應該怎樣做風險最低？
下面我們就來詳細解答一下這些常見的問題
A
對于企業來講，假陰性是不能接受的，其可能來源主要有：
培養基不合格
方法有效性問題，未完全去除抑制物
無菌檢測設備的物理殺傷：如設備剪切力，發熱影響
無菌濾筒濾膜未能完全截留微生物或者濾膜破裂
VHP滅菌后，無菌濾筒中有消毒劑殘留
無菌濾筒本身含有少量化學抑制劑
無菌濾筒的換氣濾器破損或者產生大量氣泡
B
A級區浮游菌如何監測風險最低？如何避免假陰性結果？
首先選擇具有幾乎 100 %截留率的采樣方法，比如凝膠膜過濾法。其次要減少人員和設備本身的影響，因此采樣設備必須和采樣頭分開放置，只有采樣頭部分在A級區域內，并通過 0.2 um的空氣濾芯隔離A級區與外部，整個系統必須耐受VHP在線滅菌循環。采樣頭、培養基必須是多層無菌包裝，防止A級區消毒過程中的消毒劑殘留，避免假陰性結果。
很多用戶喜歡使用GMF凝膠膜進行A、B級區域浮游菌監測，因為它可以連續采樣 8 小時，而不用擔心凝膠膜失水的問題；對細菌和病毒都具有 99.9 %以上的截留率，無菌操作結束后，將凝膠膜轉至培養基，濾膜會融化消失。因為是連續的等流速采樣，如果未檢出細菌，即可證明環境內無菌。
C
無菌檢測設備的風險控制以及無菌檢測耗材的驗收標準
用于無菌檢測的設備應該易清潔，沒有不銹鋼或者塑料的殘留死角，耐受所有可能用到的消毒方式，同時運行穩定，運行時不產熱，能夠均勻分配 2 ml - 200 ml 液體，能夠記錄SOP程序和原始檢測數據，便于溯源。在B+A級潔凈區使用的集菌設備不能有排風扇，否則會導致操作時環境監測不合格。
無菌檢測濾筒是無菌實驗中非常重要的一環，選用不當可能會導致假陽性或者假陰性結果，合格的無菌濾筒應當提供COA證書和驗證報告，并對各項風險因素測試合格，以下參數亦可用于驗收無菌濾筒。
濾筒的無菌性測試
主要是射線滅菌，COA上應證明滅菌合格。
濾膜的截留率
要保證所有的微生物被濾筒截留，防止假陰性，通過10^7粘質\\缺陷假單胞菌挑戰實驗驗證后，可保證100%截留率，驗收時通過用相應菌液過濾后培養流出液。
促生長測試
無菌濾筒在生產過程中可能會有消毒劑、化學物質殘留，此項測試表明濾筒本身無抑制作用。
濾膜完整性測試
中國藥典規定，無菌實驗前后需要測試濾膜的完整性。主要是為了防止出現假陰性的情況。可通過廠商的驗證報告證明或者采用起泡點測試法驗收。
包裝的氣密性測試
在隔離器內使用無菌濾筒時，需要進行包裝的氣密性測試，防止過氧化氫殘留導致的假陰性結果。
濾筒呼吸器的完整性測試
保證在操作過程中能夠過濾無菌空氣，防止假陽性結果，可通過廠商的驗證報告、COA 證明合格。
濾筒的破裂壓力測試
在無菌實驗過程中會存在一定的壓力，需要由廠商經過測試，驗證報告證明在一定壓力下濾筒的完整性合格，防止假陰性結果。
D
陽性對照的目的
陽性對照目的在于防止假陰性，首先要確認供試品在目前的實驗、培養條件、SOP方法下不存在抑菌作用，比如沖洗、中和方法；另外也要考慮過濾設備剪切力、產熱等影響因素。
考慮到交叉污染的風險，你需要在專用的陽性菌檢測室操作，根據供試品特性選擇對應陽性對照菌：
無抑菌及抗革蘭陽性菌：金黃色葡萄球菌為對照菌
抗革蘭陰性菌：大腸埃希菌為對照菌
抗厭氧菌：生孢梭菌為對照菌
抗真菌：白色念珠菌為對照菌
按照供試品檢驗流程，在緩沖液內加入陽性菌，接菌量<100cfu，經過檢驗設備的轉移進入無菌濾筒，培養48～72小時應生長良好，可有效避免因操作、設備物理作用導致的假陰性風險。
E
賽多利斯最低風險的解決方案
A級區域浮游菌監測
GMF 凝膠濾膜三層無菌包裝，即取即用，可以長達8小時連續進行空氣中微生物和病毒的監測，經過驗證，細菌截留率 99.9995 %，T3 噬菌體病毒截留率 99.94 %。
無菌設備與耗材
無菌檢測設備采用模塊化設計，易清潔，表面無死角，不產熱，能夠紅外掃描存儲原始數據和SOP 程序，最大限度降低設備對實驗結果的影響。獨有的無菌取樣隔膜，可以用于向濾筒內無菌添加物質或者培養過程中的無菌取樣。
快速微生物檢測試劑盒
對于需要快速了解樣品微生物狀態的需求，可以在培養幾天后通過無菌取樣隔膜取樣并通過ATP生物發光、呼吸法和核酸擴增等快速檢測方法的進行檢測，也可以直接把樣品通過PCR的方式進行微生物檢測。賽多利斯提供符合歐洲藥典驗證標準的基于qPCR方法的快速微生物檢測試劑盒，可以在3個小時內進行包括細菌、真菌和支原體的檢測。
? 文末福利來了！
無菌檢測從實驗前準備、濾膜預潤濕、產品過濾、濾膜沖洗、到裝入培養基、樣品培養，檢驗并進行方法驗證，每一步不標準的操作都會帶來風險！為此，我們的無菌檢驗專家專門編寫了一份無菌檢測操作指南，詳細講解每一步的操作和注意事項，幫助無菌檢驗人員無風險的進行日常工作。現在，在線填寫我們的問卷，您將獲得這份，快來Get你的無菌檢驗詳細操作指南吧！
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《無菌檢測最佳實踐指南》
