DAPI染色流程
DAPI染色
1．原理
DAPI為4’，6二脒基-2-苯吲哚(4’，6―diamidino-2―phenylindole)能與雙鏈DNA小槽，特別是AT堿基結合，也可插入少于3個連續AT堿基對的DNA序列中。當它與雙鏈DNA結合時，熒光強度增強20倍，而與單鏈DNA結合則無熒光增強現象，因此是一種簡易、快速和敏感地檢測DNA的方法。DAPI的熒光強度雖較Hoechst低，但熒光穩定性優于Hoechst；其特異性較溴化乙啶(ethidlium bromide，EB)和碘化丙啶(propidium iodide，P1)高。
2．溶液配制
(1)0．01mol／L PBS(pH7．0)：取0．1mol／L NaH2PO4?H2O 34ml、0．1mol／LNa2HPO4 66ml、NaCl 0．9g，溶于900m1雙蒸水；
(2)DAPI儲存液：將0．5mgDAPI溶于5．0ml PBS中，分裝，低溫長期保存；
(3)DAPI工作液：用PBS稀釋DAPI儲存液，終濃度為0．1ug／ml。
3．染色程序
(1)培養的單層細胞(未固定)或新鮮組織的冰凍切片等，PBS漂洗5分鐘；
(2)DAPI工作液室溫染色5～20分鐘(可根據實驗材料的染色結果而定)；
(3)PBS漂洗；
(4)水溶性封片劑封片，游離細胞也可直接用含DAPI的PBS封片；
(5)熒光顯微鏡觀察。
結果：正常的細胞核呈強熒光，細胞質無熒光；固定的組織細胞同樣處理，亦可得到相似的染色結果。在有支原體污染的細胞質和細胞表面可見孤立的點狀熒光，在感染痘苗病毒的細胞質中存在獨特的“星狀”熒光簇(star-like fluorescent clusters)，腺病毒感染早期胞質中也可出現熒光。
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