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    切片制作流程中脫蠟至水包括哪些環節

    2023.6.25

    取材,固定,脫水,透明,透蠟,包埋,切片,貼片,染色,透明,封藏等步驟。

    石蠟切片操作步驟:

    1、取材

    2、固定

    3、脫水:30%--50%---70%(每步60分鐘)---85%---95%--100%---100%(每步30鐘)。

    4、透明:轉入1/2二甲苯+1/2無水酒精混合液20ml透明1h,純二甲苯20ml透明1h,再用純二甲苯20ml透明40min,并回收各液。

    5、浸蠟:

    (1)將材料分別放入25%、50%、75%的石蠟-二甲苯溶液中,每級30分鐘。該過程在高于石蠟熔點3℃的溫箱中進行;

    (2)將材料放入溶解的純蠟中,時間為30分鐘,該過程再重復兩次。在高于石蠟熔點3℃的溫箱中進行。

    6、包埋

    (1)將溶解好的石蠟在加入預先折好的紙船中,石蠟溶解后應過濾后使用,以免含雜質影響切片;

    (2)材料放入紙船,并擺好在蠟中的位置,如果包埋的組織塊較多,應進行編號;

    (3)將紙船放置在冷水上加速冷卻過程。

    7、切片

    (1)修整:用刀片修成方形或長方形蠟塊;

    (2)以少許熱蠟液,將蠟塊底部粘附于小木塊上,以少許石蠟融化在蠟塊邊緣,加強粘附的強度;

    (3)木塊粘附于切片機上,調整切片機,使蠟塊切面與切片刀刃平行;

    (4)切成連續的蠟帶,切片刀的銳利度、蠟塊的硬度都會影響切片質量,可用熱水或冷水適當改變石蠟的硬度,也可在冰箱中放置一段時間;

    (5)分割蠟帶,分開的蠟片放在45℃溫水上,使蠟片展開。

    8、粘片與烤片

    (1)可用粘片劑防止蠟片滑脫,但粘附劑通常容易被染色而使切片背景有顏色,影響觀察,實驗表明,載玻片洗的足夠干凈,一般不會滑片;

    (2)用載玻片撈取展開后的蠟片,調整蠟片的位置使位于載玻片中央,自然干燥。

    9、脫蠟與醇化

    (1)將切片放入純二甲苯溶液中10分鐘,使石蠟完全溶解,共2次;

    (2)溶去石蠟的切片依次放入75%、50%、25%二甲苯-乙醇溶液中,每級10分鐘;

    (3)再將切片依次放入100%、95%、90%、80%、70%、60%、50%的乙醇溶液中進行醇化,每級10分鐘。

    10、染色

    (1)將切片放入番紅染液中30分鐘,番紅染色后,將切片依次放入50%、60%、70%、80%的乙醇溶液中分級洗脫,每級10分鐘;

    (2)洗脫后的切片放入固綠染液中染色1分鐘;

    11、脫水、透明與封片

    (1)染色后的切片依次放入90%、90%、95%、100%乙醇溶液中分級洗脫,每級10分鐘;

    (2)洗脫后的切片依次放入25%、50%、75%、100%、100%二甲苯溶液中透明,每級10分鐘,出現渾濁表示脫水不徹底,需重來;

    (3)滴1-2滴中性樹膠,將潔凈的蓋玻片傾斜放下,封片,鏡檢,選擇好的貼上標簽,性切片制作完成。


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