關于HLA分型的DNA分型方法介紹
DNA分型主要分為兩種方法:基于核酸序列識別的方法和基于序列分子構型的方法,常用的方法大致可分為大類:
①限制性片段長度多態性分析(restriction fragment length polymorphism,RFP)。其原理是不同的DNA膜板山于序列的差異在限制性內切酶作用下將被切成大小不同的片段,其電泳遷移率也發生差異,經電泳分離、印跡、探針雜交等一系列技術處理來分析目的基因。
②聚合酶鏈式反應寡核苷酸探針雜交方法PCR-SSO(sequence specifie oligonucleotide,SSO)。原理是PCR基因片段擴增后利用序列特異性寡核苷酸探針,通過雜交的方法進行擴增片段的分析鑒定。
③聚合酶鏈式反應單鏈構象多態性分析(PCR -single strand conformational polymorphism,PCR-SSCP)。PCR產物經變性為DNA單鏈,用聚丙烯酰胺凝膠電泳分離,只有一個核苷酸發生變異,其電泳遷移卒就會改變,從而進行多態性分析。
④DNA序列測定(sequencing)。能直接讀到目的片段核苷酸的完整序列,重復性好,分辨率高,自動化程度高,是HA分型最直接、最精確、最可靠的方法。常用于對新發現的HLA特異性進行DNA序列分析。
⑤特異性引物PCR技術(PCR sequence -specific primer,PCR-SSP)。采用特異性等位基因引物作PCR,擴增得到的DNA片段因分子量的不同而被凝膠電泳方法區別。
以上HA分型技術各有其自身的特點:DNA測序測定的分型方法最直接、最精確、最可靠,常用于對新發現的HA特異性進行DNA序列分析,所需設備昂貴;采用PCR-RFLP、PCR-SSCP技術進行HLA分型則敏感性和精確性較高,檢測時間比較短,但方法學復雜;PCR-SSP和SSO技術具有高特異性與敏感性、簡捷、快速、結果容易判斷,是比較理想的高效檢測配型手段,其有相當的應用前景。