ACQUITY UPLC-TUV測定奶粉和牛奶中三種牛乳清蛋白的含量 一
摘要：一種α-牛乳清蛋白和兩種β-牛乳清蛋白標準分別用超純水稀釋配制，采用ACQUITY UPLC BEH300 C18色譜柱分離，ACQUITY UPLC-TUV超高效液相色譜檢測。Bα-La、Bβb-Lg和Bβa-Lg三種乳清蛋白可達基線分離，線性范圍為1.000-100.000mg/kg，復相關系數R2_0.999，方法的檢出限為1.000 mg/kg。
關鍵詞：超高效液相色譜 奶粉 牛奶 牛乳清蛋白 Bα-La Bβb-Lg Bβa-Lg
前言
乳清蛋白是牛奶中的主要蛋白質，乳清蛋白主要包括α-牛乳白蛋白（Bα-Lactalbumin，Bα-La）、β-牛乳球蛋白（Bβ-Lactoglbulin，Bβ-Lg）、蛋白酶-胨和牛血清白蛋白等，前兩者是乳清蛋白的主要成分，分別占其總量的10-20%和40-50%，β-牛乳球蛋白包括Bβb-Lg和Bβa-Lg兩個遺傳變異體。[1-2]
乳清蛋白具有營養價值高、易消化吸收、含有多種活性成分等特點，已經被越來越多地應用于食品工業，市場上同時出現了不同種類和品牌的乳清蛋白保健品，如兒童營養蛋白粉、嬰兒配方奶粉等[3]。但有報道乳清蛋白又是一種常見的過敏原，β-乳球蛋白是最主要的過敏原，α-乳白蛋白緊隨其后[4]。UPLC以其1.7μm超細填料色譜柱和15000psi的超高效液相色譜系統，可以完美實現Bα-La、Bβb-Lg和Bβa-Lg三種乳清蛋白分離；尤其對于Bβb-Lg和Bβa-Lg兩個遺傳變異體可實現完全分離。以及配備高靈敏度Waters ACQUITY TUV紫外檢測器，整個系統檢測三種乳清蛋白檢出限達到1ppm。該檢測方法可應用于牛奶或奶粉中α-牛乳白蛋白和β-牛乳球蛋白的定量檢測。
實驗方法
材料、試劑和儀器
乙腈為色譜純，三氟乙酸為優級純，Triton X-100，氯化鈉（優級純），實驗用水為超純水（18MΩ，TOC3ppb），牛乳清蛋白標準品Bα-La、Bβb-Lg和Bβa-Lg；ACQUITY UPLC?超高效液相色譜系統，配Acquity TUV檢測器、FILTER MIXER （425μl，P/N 205000403）。
數據處理系統
Empower 2 中文版
前處理方法
稱取0.20 g奶粉樣品或2ml液態奶樣品，添加8mL（對于液態奶添加6ml）0.3M 的氯化鈉（含0.2%的TritonX-100）溶液溶解，震蕩混勻；然后用0.3%的T FA水溶液調節pH至4.4-4.6之間（以沉淀酪蛋白，其等電點為4.6，需要認真控制pH，因為乳清蛋白的等電點為4.8），定容至10 mL，均質5分鐘，室溫靜置1個小時左后，2500轉離心10分鐘，取上清液過0.2um濾膜。
結果與討論
標準配制
三種乳清蛋白標準均用超純水稀釋，配制成不同濃度的標樣進行檢測，可得到較好色譜峰形，并且配制簡單。
檢測波長的選擇
應用Waters PDA檢測器掃描得到三種乳清蛋白的紫外吸收光譜圖，如圖1至3所示。
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技術原理
