人絨毛膜促性腺激素檢測實驗步驟
概述
人促絨毛膜性腺激素(hCG) 是一種糖蛋白類激素，由胎盤分泌而得，與垂體類激素FSH、TSH及 LH的結構類似。它的α亞單位（分子量15，000~20，000道爾頓）與這些激素完全相同，但β亞單位不同，表現出不同的免疫性和生物活性。β亞單位（分子量25，000~30，000道爾頓）的多肽序列與LH的β鏈有一些相似之處，但在羧基端末的區域是其獨有的。
在受精卵進入到子宮著床后不久，滋養層就開始分泌hCG 。該激素保持黃體釋放類固醇激素，直到胎盤可釋放類固醇激素為止。在正常妊娠過程中，受精卵著床后一周后一般血清hCG 濃度就可達到50 mIU/ml (IU/l) ，6周內每隔1.5~3天即可翻倍。在妊娠的前三個月內hCG 濃度持續升高，然后慢慢下降，直到妊娠結束，生產后，hCG 濃度回復到< 5 mIU/ml (IU/l)，通常在幾天后就可達到不可測的低值。
該激素是妊娠的絕佳標志物，健康人和未妊娠個體血清中的hCG 通常< 5 mIU/ml (IU/l)，在妊娠期間，hCG 濃度如上述進行變化，不正常的出現低值或提前出現濃度大幅度的下降提示出現不正常的狀態如宮外孕或先兆流產。
最初的生物學方法通過測定不同動物的性腺器官的反應來測定hCG ，這些方法靈敏度差、難以操作并且需要大量的樣品。傳統檢測尿液中hCG 的方法是膠乳凝集或凝集抑制實驗，隨著科學技術的發展，在1972年，Vaitukaitis 等發展了放射免疫的技術來檢測hCG，使得更靈敏、更快速的檢測hCG成為可能。隨后建立的雙位點免疫放射分析使檢測更靈敏、特異和精確。
臨床意義
HCG的檢查對早期妊娠診斷有重要意義，對與妊娠相關疾病、滋養細胞腫瘤等疾病的診斷、鑒別和病程觀察等有一定價值。
1．診斷早期妊娠：孕后35～50天HCG可升至大于2500 IU/L。60～70天可達80000 IU/L，多胎妊娠者尿HCG常高于一胎妊娠。
2．異常妊娠與胎盤功能的判斷：
① 異位妊娠：如宮外孕時，本試驗只有60%的陽性率，在子宮出血3天后，HCG仍可為陽性，故HCG檢查可作為它與其它急腹癥的鑒別。HCG常為312～625 IU/L。
② 流產診斷與治療：不完全流產如子宮內尚有胎盤組織殘存，HCG檢查仍可呈陽性；完全流產或死胎時HCG由陽性轉陰性，因此可作為保胎或吸宮治療的參考依據。
③ 先兆流產：如尿中HCG仍維持高水平多不會發生難免流產。如HCG在2500 IU/L以下，并逐漸下降，則有流產的或死胎的可能，當降至600 IU/L則難免流產。在保胎治療中，如HCG仍繼續下降說明保胎無效，如HCG不斷上升，說明保胎成功。
④ 在產后4天或人工流產術后13天，血清HCG應低于1000 IU/L，產后9天或人工流產術后25天，血清HCG應恢復正常。如不符合這一情況，則應考慮有異常可能。
3．滋養細胞腫瘤診斷與治療監測
① 葡萄胎、惡性葡萄胎、絨毛膜上皮癌及睪丸畸胎瘤等患者尿中HCG顯著升高，右可達10萬到數百萬IU/L，可用稀釋試驗診斷如妊娠12周以前1：500稀釋尿液呈陽性，妊娠12周以后1：250稀釋尿液呈陽性，對葡萄胎診斷有價值。1：100～1：500稀釋尿液呈陽性對絨毛膜癌也有診斷價值，如男性尿中HCG升高，要考慮睪丸腫瘤如精原細胞癌、畸形及異位HCG瘤等。
② 滋養層細胞腫瘤患者術后3周后尿HCG應<50 IU/L，8～12周呈陰性；如HCG不下降或不轉陰，提示可能有殘留病變，這類病例常易復發，故需定期檢查。
4．其它更年期、排卵及雙側卵巢切除術均可致黃體生成素升高，因LH與HCG的α肽鏈組成相同而使采用抗HCG抗體的妊娠試驗陽性，此時可用β～HCG的單醫學教育 網收集 整理克隆二點酶免疫測定鑒別。內分泌疾病中如腦垂體疾病、甲狀腺功能亢進、婦科疾病如卵巢囊腫、子宮癌等HCG也可增高。
標本采集
A. 血清是推薦的樣品類型。
B. 遵循國家委員會制訂的臨床實驗室標準推薦的以下標本處理、運行和儲存步驟：
1. 用真空采樣管采集所有血液標本時須遵守常規注意事項。
2. 離心前使標本完全自然形成凝塊。
3. 全程保證樣品管的密閉狀態。
4. 離心獲得血清后的兩小時內，至少將500ul血清或血漿轉移到一個密閉的儲存試管中備用。
5. 儲存樣品，保持樣品管完全密閉，在室溫(15 到 30°C)條件下不超過8小時。
6. 如果8小時內不能完成檢測即應將標本放入2 到 8°C冰箱冷藏。
7. 如果24小時內不能完成檢測即應將標本放入-20°C冰箱凍藏。
8. 凍存標本在檢測前可保存6個月。
9. 標本只可復溶一次。
樣品中至多含有10mg/dl (171mol/l) 的膽紅素和脂血標本中含有相當于1800mg/dl (20.32 mmol/l)的甘油三脂、 溶血標本含有最多500mg/dl(5g/l)的血紅蛋白外不影響總βHCG檢測的結果。另外，在標本中的內源性白蛋白基礎上加入3 g/dl (30 g/l)的人白蛋白也不影響檢測結果。
正常參考范圍
1. 用Access 總βHCG 對收集到的表觀正常的成人和非孕期婦女的血清進行檢測并得到總βHCG 的數值，得到的檢測范圍如下所述，產品內頁中將在正常參考范圍內提供直方圖。
2. 和所有診斷檢測一樣， 每個實驗室均應針對各種有代表性的特殊人群建立自己的參考范圍。
3. 正常孕期內的HCG范圍表現概述如下 ，由于可能與其它的臨床參考資料存在差異，因此建議各實驗室建立自己的參考范圍。
4. 參照WHO的第三次國際標準75/537對βHCG進行特異性檢測
操作注意事項
樣品可在可報告范圍內即f 0.5–1000 mIU/ml (IU/l)被準確的定量，如果病人血清中的濃度低于可報告范圍下限時，報結果為<0.5 mIU/ml (IU/l)。如果樣品濃度高于檢測線性的上限，報告結果為<>1000 mIU/ml (IU/l)。
含量 > 1000 mIU/ml 的標本也可通過下述的離機預稀釋步驟進行稀釋：
1. 用Access沖洗液將樣品進行200倍稀釋（1：199），或者也可用實驗室規定的稀釋程序進行梯度稀釋。注意：用其它的緩沖液進行稀釋可能會導致錯誤結果。
人抗大鼠抗體(HAMA)可能會出現在已接受大鼠源性單抗免疫藥物治療的病人體內(13，14)。這個分析方法已通過特殊的方法來盡量減少這些抗體對該分析方法的影響。但是，在已知病人含有這些抗體時須小心評估檢測結果。
Access總βHCG檢測濃度為1,000,000mIU/ml時未發現鉤狀效應。
