藥品中一般雜質檢查項目與方法介紹（一）

一、熾灼殘渣檢查法

熾灼殘渣檢查法是控制有機藥物和揮發性無機藥物中非揮發性無機雜質(金屬氧化物或無機鹽類)限量的方法。有機藥物經炭化或無機藥物加熱分解后,加硫酸濕潤,先低溫再高溫(700～800℃)熾灼,使完全灰化,有機物分解揮發,殘留的非揮發性無機雜質成為硫酸鹽,稱為熾灼殘渣。

取供試品1.0～2.0g或各藥品項下規定的重量,置已熾灼至恒重的坩堝(如供試品分子結構中含有堿金屬或氟元素,則應使用鉑坩堝)中,精密稱定,緩緩熾灼至完全炭化,放冷至室溫,除另有規定外,加硫酸0.5～1ml使濕潤,低溫加熱至硫酸蒸氣除盡后,在700～800℃熾灼使完全灰化,移至干燥器內,放冷至室溫,精密稱定后,再在700～800℃熾灼至恒重,計算限量。

如供試品需將殘渣留作重金屬檢查,則熾灼溫度須控制在500～600℃。

二、干燥失重測定法

干燥失重指藥品在規定的條件下,經干燥后所減失的重量,以百分率表示。干燥失重的物質主要是水分,也有其他揮發性物質。

1.檢查方法

取供試品,混合均勻(如為較大的結晶,應先迅速搗碎使成2mm以下的小粒),取約1g或各品種項下規定的重量,置于與供試品相同條件下干燥至恒重的扁形稱量瓶中,精密稱定,除另有規定外,在105℃干燥至恒重。由減失的重量和取樣量計算供試品的干燥失重。

2.注意事項

(1)供試品干燥時,應平鋪在扁形稱量瓶中,厚度不可超過5mm,如為疏松物質,厚度不可超過10mm。放入烘箱或干燥器進行干燥時,應將瓶蓋取下,置稱量瓶旁,或將瓶蓋半開進行干燥;取出時,須將稱量瓶蓋好。置烘箱內干燥的供試品,應在干燥后取出置干燥器中放冷,然后稱定重量。

(2)供試品如未達規定的干燥溫度即融化時,應先將供試品在低于熔點5～10℃的溫度下干燥至大部分水分除去后,再按規定條件干燥。

(3)該法適用于受熱較穩定的藥物。

(4)對于受熱分解且易揮發的藥物,采用干燥劑干燥法,將供試品置干燥器中,利用干燥器內的干燥劑吸收水分至恒重。干燥劑應保持在有效狀態,常用的干燥劑有硅膠、無水氯化鈣和五氧化二磷。

(5)對于熔點低、受熱不穩定及水分難以去除的藥物,采用減壓干燥法。使用減壓干燥器或恒溫減壓干燥箱,控制壓力在2.67kPa(20mmHg)以下,使藥物中水分在減壓下以較低的干燥溫度和較短的干燥時間內得以排除。

三、水分測定法

藥品中的水包括結晶水和吸附水。過多的水分不僅使藥物的有效成分含量降低,還易使藥物水解、霉變,影響其理化性狀和生理作用。因此,《中華人民共和國藥典》(2015)采用卡爾-費休(Karl Fischer,簡稱費休)法、烘干法、減壓干燥法和甲苯法測定。費休法,操作簡便、專屬性強、準確度高,適用于受熱易被破壞的藥物,因而成為國際上通用的水分測定法。本節只介紹費休法。

1.原理

該法為非水氧化還原滴定反應,采用由碘、二氧化硫、吡啶和甲醇按一定比例組成的卡爾-費休試液做標準滴定液。利用碘氧化二氧化硫時,需一定量水分參加反應。

因上述反應可逆,加無水吡啶和無水甲醇使反應順利進行。

2.容量滴定法

(1)費休試液的配制和標定

①配制? ?稱取碘(置硫酸干燥器內48h以上)110g,置干燥的具塞錐形瓶中,加無水吡啶160ml,注意冷卻,振搖至碘全部溶解后,加無水甲醇300ml,稱定重量,將錐形瓶置冰浴中冷卻,在避免空氣中水分侵入的條件下,通入干燥的二氧化硫至重量增加72g,再加無水甲醇使成1000ml,密塞,搖勻,在暗處放置24h。

②標定? ?精密稱取純化水10～30mg,用水分測定儀直接標定。或精密稱取純化水10～30mg,置干燥的具塞玻瓶中,除另有規定外,加無水甲醇適量,在避免空氣中水分侵入的條件下,用費休試液滴定至溶液由淺黃色變為紅棕色,或用電化學方法指示終點;另作空白試驗,按下式計算:

(2)測定方法???

精密稱取供試品適量(約消耗費休試液1～5ml),除另有規定外,溶劑為無水甲醇,用水分測定儀直接測定。或精密稱取供試品適量,置干燥的具塞玻瓶中,加溶劑適量,在不斷振搖(或攪拌)下用費休試液滴定至溶液由淺黃色變為紅棕色,或用永停滴定法指示終點;另作空白試驗,按下式計算:

3.庫侖滴定法

本法仍以卡爾費休反應為基礎,與容量滴定法相比不同的是用永停滴定法指示終點。本法主要用于測定含微量水分(0.0001%～0.1%)的物質,特別適用于測定化學惰性物質如烴類、醇類和酯類中的水分,且無需標定滴定液。

于滴定杯加入適量費休試液,先將試液和系統中的水分預滴定除去,然后精密量取供試品適量(含水量為0.5～5mg),迅速轉移至滴定杯中,以永停滴定法指示終點,從儀器顯示屏上直接讀取供試品中水分的含量,其中每1ml水相當于10.72C的電量。

4.注意事項

(1)配制費休試液對試劑的純度要求較高,特別對試劑含水量的要求應控制在0.1%以下。所用的碘應置硫酸干燥器內干燥48h以上。二氧化硫如取自貯氣鋼瓶,應使其通過濃硫酸洗氣瓶脫水。所用儀器應干燥,并能避免空氣中的水分侵入。整個測定操作應迅速,并在干燥處進行。

(2)費休試液不穩定,應遮光、密封,置陰涼干燥處保存,下次臨用前應重新標定。費休試液的F值在4.0mg/ml上下為宜,若F值降低至3.0mg/ml以下時,滴定終點不敏銳,不宜再用。

(3)費休法不適于測定氧化劑、還原劑以及能與試液生成水的化合物的測定,如鉻酸鹽、過氧化物、硫代硫酸鹽、硫化物、堿性氧化物以及含氧弱酸鹽等。一些羰基化合物如活潑的醛、酮可與試劑中的甲醇作用,生成縮醛和水,也會干擾測定。

四、溶液顏色檢查法

本法系將藥物溶液的顏色與規定的標準比色液比較,或在規定的波長處測定其吸光度。品種項下規定的“無色”系指供試品溶液的顏色相同于水或所用溶劑,“幾乎無色”系指供試品溶液的顏色不深于相應色調0.5號標準比色液。

1.目視比色法

除另有規定外,取各品種項下規定量的供試品,加水溶解,置25ml納氏比色管中,加水稀釋至10ml,另取規定色調和色號的標準比色液10ml,置于另一25ml納氏比色管中,兩管同置白色背景上,自上向下透視,或同置白色背景前平視觀察,供試品管呈現的顏色與對照管的顏色比較,不得更深。如供試管呈現的顏色與對照管的顏色深淺非常接近或色調不完全一致,使目視觀察無法辨別兩者的深淺時,應改用第三法(色差計法)測定,并將其測定結果作為判定依據。

藥典規定用重鉻酸鉀液(每1ml含0.800mg的K₂Cr₂O₇)為黃色原液,硫酸銅液(每1ml含62.4mg的CuSO₄·5H₂O)為藍色原液,氯化鈷液(每1ml中含59.5mg CoCl₁₂·6H₂O)為紅色原液。

分別取不同比例的以上三種比色液與水,配成深黃色、黃綠色、黃色橙黃色、橙紅色和棕紅色六種色調的標準貯備液。并按規定量取各種色調標準儲備液,加水稀釋至10ml,即得黃綠色、黃色、橙黃色、橙紅色和紅色的1~10號的標準比色液。

檢查時根據藥物有色雜質的顏色以及對其限量要求,選擇相應顏色一定色號的標準比色液作為對照液,進行比較。如注射用對氨基水楊酸鈉溶液顏色的檢查方法:取供試品一瓶,加水溶解制成每1ml含0.2g的溶液,與黃色6號標準比色液比較,不得更深。

2.分光光度法

用分光光度法檢查有色雜質,通過測定溶液的吸收度而更能反映溶液的顏色變化。除另有規定外,取各供試品項下規定量的供試品,加水溶解并使成10ml,必要時濾過,濾液照紫外-可見分光光度法于規定波長處測定,吸光度不得超過規定值。

如維生素C易受外界條件影響而變色,規定取本品3.0g,加水15ml,振搖使溶解,溶液經4號垂熔玻璃漏斗濾過,濾液于420nm波長處測定吸收度,不得過0.03。

3.色差計法

本法是通過色差計直接測定溶液的色差值,對其顏色進行定量表述和分析的方法。當目視比色法較難判定供試品與標準比色液之間的差異時,應考慮采用本法進行測定與判斷。

供試品與標準比色液之間的顏色差異,可以通過分別比較供試品與水之間的色差值來得到,也可以通過直接比較它們之間的色差值來得到。

測定時除另有規定外,用水對儀器進行校準。取按各品種項下規定的方法制得的供試品溶液和標準比色液,置儀器上進行測定,供試品溶液與水的色差值△E^*應不超過相應色調的標準比色液與水的色差值△E₀^*。

也可以將預先測定好的各色調色號的標準比色液對水的標準色差值△E₀^*輸入到儀器,然后直接測量供試品溶液對水的色差值△E^*;若△E^*值小于等于△E₀^*,供試品溶液顏色合格,反之為不合格。