RNA熒光（RiboGreen）定量檢測試劑盒使用說明
主要用途
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RNA熒光（RiboGreen）定量檢測試劑是一種旨在通過使用RiboGreen熒光染料與樣品中RNA的高度結合而產生熒光信號來精確定量樣品中RNA含量的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種分子生物學實驗，例如體外轉錄RNA、Northern
Bolt、S1核酸酶檢測、RNA酶保護檢測、cDNA庫制備、逆轉錄PCR和差異顯示PCR中RNA含量分析。產品嚴格無菌，即到即用，性能穩定，高度敏感。
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技術背景
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作為RNA染色劑之一的RiboGreen熒光染料與樣品中RNA，包括rRNA、mRNA等結合，產生熒光信號。RiboGreen技術可以檢測到低達1納克RNA的變化。RNA的微量增加引起熒光信號強度（Intensity）或相對熒光單位（RFU）的顯著增加。其自發熒光（Autofluorescence）忽略不計，重復性標準差異（Standard
Deviation）低，不受樣品化學成分的干擾。
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產品內容
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染色液（Reagent A） ????15微升
稀釋液（Reagent B） ?????5毫升
標準液（Reagent C） ????????200微升
產品說明書? ????????????????????????1份
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保存方式
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保存染色液（Reagent A）和標準液（Reagent C）在－20℃冰箱里，避免反復凍融；其余的保存在4℃冰箱里，染色液（Reagent A）避免光照，有效保證6月
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用戶自備
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1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器
200微升1厘米光徑比色皿或黑色96孔板：用于熒光分析的容器
熒光分光光度儀或熒光酶標儀：用于熒光定量分析
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實驗步驟
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測定準備
準備好待測樣品，置于冰槽里
設定好熒光分光光度儀：激發波長485±10nm，散發波長530±12.5nm，并置零
實驗開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的染色液（Reagent A）置于冰槽里融化。然后移出500微升稀釋液（Reagent B）到新的1.5毫升離心管，加入2.5微升染色液（Reagent A），混勻后，用錫紙包裹，標記為染色工作液（5次測定量），放在暗室里。然后進行下列操作。
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構建標準曲線
準備好5個1.5毫升離心管，標記為1至5號管
分別加入100微升稀釋液（Reagent B）到每個離心管
移取100微升標準液（Reagent C）到1號管，混勻
小心移取100微升1號管稀釋的標準液（Reagent C）到2號管，混勻
小心移取100微升2號管稀釋的標準液（Reagent C）到3號管，混勻
小心移取100微升3號管稀釋的標準液（Reagent C）到4號管，混勻
將1至5號管放進冰槽里備用；標準管含量見下表
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| 管號 | 稀釋液（Reagent B） | 標準液（Reagent C） | 標準RNA總量 |
| 1 | 100微升 | 100微升 | 1微克/毫升 |
| 2 | 100微升 | 100微升1號管 | 0.5微克/毫升 |
| 3 | 100微升 | 100微升2號管 | 0.25微克/毫升 |
| 4 | 100微升 | 100微升3號管 | 0.125微克/毫升 |
| 5 | 100微升 | 空對照 | 0 |
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移取100微升含有染色液（Reagent A）和稀釋液（Reagent B）的染色工作液到新的比色皿
加入100微升上述配制的標準液
室溫下，孵育5分鐘，避免光照
即刻放進熒光分光光度儀測讀：獲得相對熒光單位（Relative Fluorescence Unit；RFU）
重復實驗步驟8至11四次
繪制標準曲線：縱座標（Y軸）為相對熒光單位（RLU）；橫坐標（X軸）為DNA含量（微克/毫升）
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樣品檢測
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移取100微升含有染色液（Reagent A）和稀釋液（Reagent B）的染色工作液到新的比色皿
加入100微升待測樣品
室溫下，孵育5分鐘，避免光照
即刻放進熒光分光光度儀測讀：獲得相對熒光單位（Relative Fluorescence Unit；RFU）
根據標準曲線獲得樣品對應RNA含量（微克/毫升）
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注意事項
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本產品為25次操作，包括標準曲線測定
整個操作須帶手套，建議使用濾芯槍頭，并格外小心，防止降解RNA
建議所有的操作用品屬于RNA專用
使用新鮮配制的染色工作液，務必不要超過2小時，且注意避光
孵育時，避免光照
系統檢測，標準曲線測定1次即可；如果儀器更換，則需要重新測定1次
如果熒光讀數過高，可以相應稀釋樣品量
鹽類、尿素、乙醇、氯仿、去垢劑、蛋白、瓊脂糖不會干擾檢測
如果樣品中含有DNA，建議使用5單位DNA酶，37℃孵育90分鐘預處理
