植物水溶性總糖的提取和含量測定——蒽酮比色法
一、目的：
1.掌握蒽酮法測定可溶性糖含量的原理和方法。
2.學習植物可溶性糖的一種提取方法。
3.學習分光光度計的使用。
二、原理：
糖類在較高溫度下可被濃硫酸作用而脫水生成糠醛或羥甲基糖醛后，與蒽酮(C14H10O)脫水縮合，形成糠醛的衍生物，呈藍綠色。該物質在620 nm處有最大吸收，在150 μg/mL范圍內，其顏色的深淺與可溶性糖含量成正比。
這一方法有很高的靈敏度，糖含量在30 μg左右就能進行測定，所以可做為微量測糖之用。一般樣品少的情況下，采用這一方法比較適合。
三、儀器、試劑和材料
1.儀器：電子天平，超聲波清洗器，電熱恒溫水浴鍋，抽濾設備，分光光度計，容量瓶，刻度吸管等
2.試劑：
(1)葡萄糖標準液：l00 μg/mL
(2)濃硫酸
(3)蒽酮試劑：0.2 g蒽酮溶于100 mL濃 H2SO4中。當日配制使用。
3.材料：甜高粱，甘草
四、操作步驟
1.葡萄糖標準曲線的制作
取7支大試管，按下表數據配制一系列不同濃度的葡萄糖溶液
：
在每支試管中立即加入蒽酮試劑4.0mL，迅速浸于冰水浴中冷卻，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加蓋，以防蒸發。自水浴沸騰起計時，準確煮沸l0
min，取出，用冰浴冷卻至室溫，在620
nm波長下以第一管為空白，迅速測其余各管吸光值。以標準葡萄糖含量（μg）為橫坐標，以吸光值為縱坐標，繪出標準曲線。
2.植物樣品中可溶性糖的提取：將樣品粉碎，105 oC烘干至恒重，精確稱取1~5
g，置于50mL三角瓶中，加沸水25mL，加蓋，超聲提取10
min，冷卻后過濾（抽濾），殘渣用沸蒸餾水反復洗滌并過濾（抽濾），濾液收集在50mL容量瓶中，定容至刻度，得可溶性糖的提取液。
3.稀釋：吸取提取液2mL，置于另一50mL容量瓶中，以蒸餾水定容，搖勻。
4.測定：吸取1 mL已稀釋的提取液于試管中，加入4.0 mL蒽酮試劑，平行三份；空白管以等量蒸餾水替代提取液。以下操作同標準曲線制作。根據A620平均值在標準曲線上查出葡萄糖的含量（μg）。
?
五、結果處理：
?
其中：C——在標準曲線上查出的糖含量（μg），
V總——提取液總體積（mL），
V測——測定時取用體積（mL），
D——稀釋倍數，
W——樣品重量（g），
106——樣品重量單位由g換算成μg的倍數
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六、注意事項：
1.該顯色反應非常靈敏，溶液中切勿混入紙屑及塵埃。
2.H 2SO4要用高純度的。
3.不同糖類與蒽酮的顯色有差異，穩定性也不同。加熱、比色時間應嚴格掌握。
|
管號 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
|
葡萄糖標準液（mL） |
0 |
0.1 |
0.2 |
0.3 |
0.4 |
0.6 |
0.8 |
|
蒸餾水（mL） |
1 |
0.9 |
0.8 |
0.7 |
0.6 |
0.4 |
0.2 |
|
葡萄糖含量（μg） |
0 |
10 |
20 |
30 |
40 |
60 |
80 |
